申请/专利权人：中国热带农业科学院橡胶研究所

申请日：2023-08-14

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN117441612A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.02.13#实质审查的生效;2024.01.26#公开

摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种油棕无籽种质体细胞培养获得再生植株的方法，以美洲油棕与非洲油棕的杂交种的无籽种质幼叶为外植体材料进行组培繁育，包括胚性愈伤组织诱导、体细胞胚诱导、体细胞胚萌芽培养、体胚芽生根诱导、驯化移栽等步骤。本发明工艺简单，操作方便，可以满足批量种苗繁殖，适合工厂化育苗和规模化栽培，可为美洲油棕与非洲油棕的杂交种O×G的无籽种质种苗规模化高效繁育提供技术支持，对高效繁育无籽油棕优良种植材料和应用于生物技术育种以缩短品种选育周期具有现实意义。

主权项：1.一种油棕无籽种质体细胞培养获得再生植株的方法，其特征在于，其步骤如下：1、胚性愈伤组织诱导：取成龄美洲油棕与非洲油棕的杂交种的无籽种质幼叶作为外植体，切成小片后接种到胚性愈伤组织诱导培养基中，在26～30℃下暗培养获得胚性愈伤组织；所述胚性愈伤组织诱导培养基：NH42SO4280～380mgL+H3BO35～7mgL+KNO3520～600mgL+CaNO32350～410mgL+TDZ0.1～1mgL+KH2PO4170mgL+MgSO4180.7mgL+K2SO4430-480mgL+CaCl272.5mgL+CuSO4·5H2O0.1-0.5mgL+Na2-EDTA37.3mgL+FeSO4·7H2O27.85mgL+Na2MoO4·2H2O0.2～0.3mgL+MnSO4·4H2O29.4mgL+ZnSO4·7H2O8.6mgL+肌醇80～120mgL+烟酸0.2～0.8mgL+盐酸吡哆醇0.5～3mgL+盐酸硫胺素1～6mgL+氨基乙酸2.0mgL+活性炭1000～3000mgL+毒锈定30～100mgL+蔗糖30000mgL+泛酸钙0.5～5mgL+水解酪蛋白500～1000mgL，培养基灭菌前调其pH为5.6；2、体细胞胚诱导培养：取胚性愈伤组织接种到体细胞胚诱导培养基中，在26～30℃下暗培养获得体细胞胚；所述体细胞胚诱导培养基：NH42SO4280～380mgL+H3BO35～7mgL+KNO3520～600mgL+CaNO32350～410mgL+KH2PO4170mgL+MgSO4180.7mgL+K2SO4430～480mgL+CaCl272.5mgL+CuSO4·5H2O0.1～0.5mgL+Na2-EDTA37.3mgL+FeSO4·7H2O27.85mgL+IBA0.10～0.5mgL+Na2MoO4·2H2O0.2～0.3mgL+MnSO4·4H2O29.4mgL+ZnSO4·7H2O8.6mgL+6-BA1.0～5.0mg+肌醇80～120mgL+烟酸0.2～0.8mgL+盐酸吡哆醇0.5～3mgL+盐酸硫胺素1～6mgL+氨基乙酸2.0mgL+活性炭1000～2000mgL+琼脂6000mgL+蔗糖45000mgL+生物素0.05～0.5mgL+谷氨酰胺500～1000mgL+椰子汁50～200mlL，培养基灭菌前调其pH为5.6；3、体细胞胚萌芽培养：将获得的体细胞胚接种到萌芽培养基中，在26～30℃、3000lx光照下培养获体胚芽；所述萌芽培养基：NH42SO4280～380mgL+H3BO35～7mgL+KNO3520～600mgL+CaNO32350～410mgL+KH2PO4170mgL+MgSO4180.7mgL+K2SO4430～480mgL+CaCl272.5mgL+CuSO4·5H2O0.1～0.5mgL+Na2-EDTA37.3mgL+FeSO4·7H2O27.85mgL+Na2MoO4·2H2O0.2～0.3mgL+MnSO4·4H2O29.4mgL+ZnSO4·7H2O8.6mgL+肌醇80～120mgL+烟酸0.2～0.8mgL+盐酸吡哆醇0.1mgL+盐酸硫胺素0.5mgL+氨基乙酸2.0mgL+蔗糖4500mgL+琼脂6000mgL+谷氨酰胺500mgL+活性炭1000～2000mgL+椰子汁50～200mlL，pH为6.0；4、体胚芽生根培养：待体胚芽长至3片叶以上时，接种于生根培养基，在26～30℃、3000lx光照下进行生根诱导培养获得完整再生植株；所述生根培养基：WPM+NAA1mgL+多效唑0.15～0.6mgL+IBA2.5～5mgL+蔗糖3000mgL，pH为6.0；5、驯化移栽：将具3片全展叶、有次级侧根的组培苗移至温室，炼苗后取出洗净根部培养基，栽植于移栽基质中。所述移栽基质为沙壤表土、泥炭和腐熟牛粪按体积比以9:8:3的比例复配所得的混合基质。

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