申请/专利权人：浙江工业大学

申请日：2022-04-25

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN114736814B

主分类号：C12N1/15

分类号：C12N1/15;C12N15/80;C12N15/54;C12P17/06;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.09#授权;2022.07.29#实质审查的生效;2022.07.12#公开

摘要：本发明提供了一株高产monacolink的重组红曲—红色红曲菌（Monascusruber）浙工红曲4号，由红曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因（pksCT）和红曲色素合成基因（MpigF和MpigH）并去除外源基因后获得。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种高产monacolink且不含外源基因的重组红曲菌，该重组红色红曲菌在大米固体培养基中发酵30d后monacolink的产量相对于红曲菌AS3.549提高了15.09%，为工业上红曲菌种改良提供了新的途径。

主权项：1.一种构建高产moancolink重组红曲菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）以红曲菌AS3.549基因组为模板，扩增出pksCT基因的UTL1核酸片段和UTR1核酸片段；MpigF基因的UTL2核酸片段和UTR2核酸片段；MpigH基因的UTL3核酸片段和UTR3核酸片段；（2）以根瘤农杆菌载体pPZP201为母核，与核酸替代片段LY3连接得到pLY3双元载体，构建载体pLY3::∆pksCT、pLY3::∆MpigF、pLY3::∆MpigH；所述核酸替代片段LY3依次包括以下序列：左LoxP序列、5U启动子、Cre酶序列、NOS终止子、hph序列和右LoxP序列；（3）获得pksCT基因、MpigH基因和MpigF基因缺失且不含外源基因的红曲菌浙工红曲4号；所述核酸替代片段LY3序列如SEQIDNO.7所示；所述UTL1核酸片段序列如SEQIDNO.1所示，所述UTR1核酸片段序列如SEQIDNO.2所示；所述UTL2核酸片段序列如SEQIDNO.3所示，所述UTR2核酸片段序列如SEQIDNO.4所示；所述UTL3核酸片段序列如SEQIDNO.5所示，所述UTR3核酸片段序列如SEQIDNO.6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江工业大学 一株高产monacolin k的重组红曲菌及其构建方法与应用

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