申请/专利权人：江南大学

申请日：2023-11-24

公开（公告）日：2024-02-23

公开（公告）号：CN117587000A

主分类号：C12N9/90

分类号：C12N9/90;C12N15/61;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/38;C12P19/12;A23L33/125;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.12#实质审查的生效;2024.02.23#公开

摘要：本发明公开了通过构建体内CE‑MI酶级联催化体系提高乳糖到乳果糖转化率，属于酶工程领域。本发明以大肠杆菌表达CsCEQ371E实现乳糖的细胞发酵生产，通过将大肠杆菌的lacZ基因敲除将乳果糖产量达到3.55gL。为解除依匹乳糖到乳果糖结构异构转化的限速步骤，提高乳糖到乳果糖转化率，挖掘到一款MmMI酶与CsCE酶级联催化，产量达到4.0gL。通过定点饱和突变获得一款结构异构催化性能提升的突变体MmMIF242N；在此基础上，通过RBS工程调控优化CsCE与MmMI的表达量，在添加8gL乳清粉作为底物时摇瓶发酵，乳果糖产量达到6.12gL，其转化率91.3％，为目前报道最高水平。

主权项：1.一种D-甘露糖异构酶MmMI突变体，其特征在于，所述突变体为，将氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的D-甘露糖异构酶MmMI的第241位的亮氨酸突变为丙氨酸或谷氨酸得到的，命名为L241A或L241E；或将氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的D-甘露糖异构酶MmMI的第242位的苯丙氨酸突变为谷氨酸、天冬酰胺或苏氨酸得到的，命名为F242E、F242N或F242T；或将氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的D-甘露糖异构酶MmMI的第243位的精氨酸突变为甘氨酸，命名为R243G；或将氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的D-甘露糖异构酶MmMI的第244位的脯氨酸突变为丙氨酸得到的，命名为P244A。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 通过构建体内CE-MI酶级联催化体系提高乳糖到乳果糖转化率

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