申请/专利权人：深圳瑞吉生物科技有限公司

申请日：2020-01-10

公开（公告）日：2024-02-27

公开（公告）号：CN112111524B

主分类号：C12N15/87

分类号：C12N15/87;C12N15/10;A61K47/26;A61K47/42

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.27#授权;2023.07.14#著录事项变更;2021.05.25#著录事项变更;2021.01.08#实质审查的生效;2020.12.22#公开

摘要：本发明提供了一种mRNA‑GalNAc靶向分子的制备方法及其体内递送系统和应用，所述mRNA‑GalNAc靶向分子包括mRNA分子，所述mRNA分子与3’带有N‑乙酰半乳糖胺修饰的PolyA连接；所述mRNA分子的序列包含5’帽子和目的基因序列。采用本发明的技术方案，通过将表达目的基因的mRNA分子直接与偶联有GalNAc的polyA序列进行连接，合成出3’端带有GalNAc的mRNA分子，从而实现达到肝脏靶向性药物递送的目的，方法更加简单可靠，解决了现有的mRNA与N‑乙酰半乳糖胺的偶合难题。

主权项：1.一种体内递送系统，其特征在于：其包括mRNA-GalNAc靶向分子和带正电荷的蛋白分子；所述带正电荷的蛋白为鱼精蛋白和人血清白蛋白；所述mRNA分子与3’带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA连接；所述mRNA分子的序列包含5’帽子和目的基因序列；所述mRNA分子通过夹板DNA与3’带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA连接；所述mRNA分子采用包含DNA片段的质粒通过体外转录得到，其中所述DNA片段包括启动子、目的基因、第一夹板DNA序列依次连接而成；所述3’带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA片段，其5’端为能与第二夹板DNA序列互补配对的RNA序列，所述第一夹板DNA序列和第二夹板DNA序列构成夹板DNA序列；所述第一夹板DNA序列如SEQIDNo.1所示，所述第二夹板DNA序列如SEQIDNo.2所示，所述启动子为T3或T7或SP6启动子；所述目的基因序列如SEQIDNo.4或SEQIDNo.5所示；该体内递送系统通过佐剂鱼精蛋白人血清白蛋白调节所述带有N-乙酰半乳糖胺修饰的mRNA靶向分子的电荷属性得到，其中所述鱼精蛋白、人血清白蛋白的摩尔比为1∶2.75～5.5或1∶6～20；所述mRNA-GalNAc靶向分子的制备方法，包括以下步骤：步骤S1，设计并合成一段带有启动子序列、目的基因序列的质粒载体；步骤S2，以步骤S1的质粒载体为模板进行体外转录，得到mRNA分子，所述mRNA分子的序列包含5’帽子和目的基因序列；步骤S3，在连接酶的作用下，mRNA分子与3’带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA序列结合，得到mRNA-GalNAc靶向分子；步骤S1中，所述质粒载体中的DNA序列包括依次连接的启动子序列、目的基因序列和第一夹板DNA序列；步骤S2中得到mRNA分子的序列包含依次连接的5’帽子、目的基因序列、第一夹板DNA序列的互补序列对应的RNA序列；步骤S3中，所述3’带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA片段，其5’端为能与第二夹板DNA序列互补配对的RNA序列，所述第一夹板DNA序列和第二夹板DNA序列构成夹板DNA序列；在退火反应中，带有第一夹板DNA序列的互补序列的mRNA分子与带有第二夹板DNA序列互补配对序列的PolyA分子分别与夹板DNA互补结合，在T4DNA连接酶作用下，所述mRNA分子3’端羟基与带有N-乙酰半乳糖胺修饰的PolyA的5’端磷酸基团连接，经过DNA酶处理后，得到带有N-乙酰半乳糖胺修饰的mRNA靶向分子。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳瑞吉生物科技有限公司 mRNA-GalNAc靶向分子的制备方法及其体内递送系统和应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD