申请/专利权人：南京林业大学

申请日：2023-04-11

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN117004751B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6844;C07K14/37;C12N15/31;C12N15/11;C12R1/77

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.01#授权;2023.11.24#实质审查的生效;2023.11.07#公开

摘要：本发明公开了一种茄镰孢菌Fusariumsolani的检测新靶标g7594及其检测引物、检测方法和检测试剂盒，该检测靶标g7594的蛋白序列如SEQIDNO：1所示，编码该蛋白的DNA序列如SEQIDNO：2所示。同时，本发明还公开了特异性检测靶标g7594的引物及探针组合，其正向引物Fsg7594RPA‑F1序列如SEQIDNO：3所示，其反向引物Fsg7594RPA‑R1序列如SEQIDNO：4所示，ssDNArepoter序列如SEQIDNO：5所示，FsCrRNA如SEQIDNO：6所示。建立CRISPR‑Cas12a荧光检测，其特异性强，灵敏度高，证明g7594适合作为茄镰孢菌Fusariumsolani的检测靶标，从而实现对于植物上携带的有害病原茄镰孢菌F.solani实现分子检测。

主权项：1.一种基于CRISPR-Cas12a快速可视化检测茄镰孢菌Fusariumsolani的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1以茄镰孢菌Fusariumsolani的基因组中g7594为靶基因进行重组酶聚合酶RPA扩增，所述g7594的DNA序列如SEQIDNO:1所示，其编码的蛋白质序列如SEQIDNO:2所示，所述重组酶聚合酶RPA扩增采用序列如SEQIDNO：3所示的正向引物Fsg7594RPA-F1和序列如SEQIDNO：4所示的反向引物Fsg7594RPA-R1；2使用步骤1获取的重组酶聚合酶扩增RPA产物，Cas12a蛋白、荧光基团和荧光淬灭基团双标记的单链DNA探针，以及crRNA分子在CRISPR-Cas12a技术检测体系里反应，所述单链DNA探针的核苷酸序列为：5’-TTATT-3’，所述单链DNA探针在5’端被标记荧光基团6-FAM，在3’端被标记荧光淬灭基团BHQ1，所述crRNA分子序列如SEQIDNO.6所示；3对步骤2的反应体系进行可视化荧光反应检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京林业大学 一种茄镰孢菌(Fusarium solani)的分子检测靶标g7594及其应用

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