申请/专利权人：上海氘峰医疗科技有限公司

申请日：2020-06-22

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN111912826B

主分类号：G01N21/65

分类号：G01N21/65;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.01#授权;2020.11.27#实质审查的生效;2020.11.10#公开

摘要：本发明涉及一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，设置不同浓度的抗肿瘤药物实验组及对照组，其中抗肿瘤药物浓度为0并添加重水的一组作为阳性对照组pos，抗肿瘤药物浓度为0不添加重水的一组作为阴性对照组neg；将实验组与对照组培养后的肿瘤细胞消解下来离心清洗后滴加在低拉曼背景芯片上进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分别计算实验组和对照组的C‑DC‑D+C‑H，根据实验组和对照组的C‑DC‑D+C‑H确定待测抗肿瘤药物对肿瘤细胞是否有效。与现有技术相比，本发明从细胞代谢水平评估抗肿瘤药物的有效性，与传统方法中通过计算细胞数量评估药物有效性的方法相比，能更准确地评估某些仅抑制细胞生长而不抑制细胞代谢的抗肿瘤药物，进而指导用药。

主权项：1.一种在细胞水平上进行抗肿瘤药物药效评估的方法，其特征在于，通过拉曼-重水标记联用技术检测抗肿瘤药物作用后的细胞代谢活性，从代谢水平评估抗肿瘤药物的药效；包括以下步骤：设置不同浓度的抗肿瘤药物实验组及对照组，其中抗肿瘤药物浓度为0并添加重水的一组作为阳性对照组，抗肿瘤药物浓度为0不添加重水的一组作为阴性对照组；实验组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，分别加入不同浓度抗肿瘤药物，阳性对照组、阴性对照组中，将消解后的肿瘤细胞培养至细胞贴壁后，不加入抗肿瘤药物，实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水，阴性对照组继续培养第一时间段后不加入重水，继续孵育第二时间段后将细胞消解下来离心清洗，然后滴加在低拉曼背景芯片上进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分别计算实验组和对照组的C-DC-D+C-H，根据实验组和对照组的C-DC-D+C-H确定待测抗肿瘤药物对肿瘤细胞是否有效；实验组、阳性对照组继续培养第一时间段后加入重水的添加比例30%vv；使用WITEC-alpha300拉曼光谱仪采集细胞的拉曼图谱；光栅600gmm，光谱中心设置为2300，激光器选择532nm，光斑大小350nm；采集细胞的拉曼光谱时使用100倍物镜，在视野中找到细胞，然后将光斑聚焦到细胞中心，设置激光功率7~9mW，累积时间3s；每组采集20~30个细胞的拉曼图谱；数据处理时截取1770~3400cm-1图谱，然后使用仪器自带软件对数据进行去背景和归一化处理；C-D峰和C-H峰分别位于2000-2300cm-1和2800-3100cm-1；利用Rstudio软件计算C-D峰与C-D峰加C-H峰的面积比值，即C-DC-D+C-H；实验组中，药物浓度设置分别为0.5μM、1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、15μM、20μM；细胞培养使用DMEM培养基；所述第一时间段为24h，第二时间段为48h；所述低拉曼背景芯片购于上海氘峰医疗器械有限公司，CatNo1001；所述抗肿瘤药物为PDK-1抑制剂GSK2334470。

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权利要求：

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