申请/专利权人：华南理工大学

申请日：2023-09-22

公开（公告）日：2024-03-08

公开（公告）号：CN117660458A

主分类号：C12N15/115

分类号：C12N15/115;C12N15/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.26#实质审查的生效;2024.03.08#公开

摘要：本发明公开靶向PBP2a的非天然核酸适配体获取方法。该方法为筛选靶向PBP2a非天然核酸适配体的过程中，第二轮以后的转录文库制备方法主要采用5’‑磷酸化扩增引物对筛选到的XNA序列反转录产物做PCR扩增，该引物与模板3’‑端互补40nt，包含与转录产物5’‑端互补的20nt以及转录引物部分。PCR扩增产物用Lambda核酸外切酶降解，通过控制降解时间，能最大效率降解掉磷酸化的序列以获取单链DNA文库，然后再使用SFM4‑6聚合酶转录获取下一轮的XNA文库。在筛选靶向PBP2a非天然核酸适配体的过程中，大多数未结合的XNA文库被除去，随着筛选轮数的增加，与靶标蛋白有结合活性的XNA逐渐富集。

主权项：1.靶向PBP2a的非天然核酸适配体获取方法，其特征在于，筛选靶向PBP2a非天然核酸适配体的过程中，第二轮以后的转录文库制备方法主要采用5’-磷酸化扩增引物和反转录引物对筛选到的XNA序列反转录产物做PCR扩增，该引物与模板3’-端互补40nt，包含与转录产物5’-端互补的20nt以及转录引物5’-AATACGACTCACTATTAGGG-3’部分；PCR扩增产物用Lambda核酸外切酶降解，通过控制降解时间，能最大效率降解掉磷酸化的序列以获取单链DNA文库，然后再使用SFM4-6聚合酶转录获取下一轮的XNA文库；在筛选靶向PBP2a非天然核酸适配体的过程中，第一轮洗脱次数为10次，大多数未结合的XNA文库被除去，随着筛选轮数的增加，与靶标蛋白有结合活性的XNA逐渐富集。

全文数据：

权利要求：

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