申请/专利权人：江南大学

申请日：2023-01-10

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN116559307B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2023.08.25#实质审查的生效;2023.08.08#公开

摘要：本发明公开了一种菌株发酵液中紫苏醇的高效液相色谱检测方法，本发明方法能够直接对菌株发酵液中紫苏醇进行高效液相色谱检测，相比于气相色谱的检测方法,更为直接,直接对培养基进行检测,省去了气相色谱对培养基的后处理步骤,步骤相对于气相色谱来说较为简单,并且检测灵敏度与气象色谱检测相当，同时还能够减少样品的损失率。

主权项：1.一种菌株发酵液中紫苏醇的高效液相色谱检测方法，其特征在于：包括，配制紫苏醇标准品溶液，通过紫外分光光度法确定其检测波长；通过高效液相色谱法测定梯度浓度的紫苏醇标准品溶液；绘制标准曲线，计算得到线性回归方程；通过高效液相色谱法测定待测菌株发酵液中紫苏醇的产量，代入线性回归方程计算，得到最终结果；其中，高效液相色谱测定的色谱条件为：色谱柱：C18，4.6mm×150mm，5µm；流动相：无水甲醇：水=60:40，VV；流动相流速为1.0mLmin；检测波长：210nm；柱温：40℃；所述待测菌株发酵液的制备方法为：构建携带分枝杆菌来源的紫苏醇合成酶的质粒pET-Cyp450，序列如SEQIDNO:1所示，取pET-Cyp450质粒加入大肠杆菌BL21DE3感受态细胞中，冰浴30min后放入42℃水浴锅中，热击90s，立即冰浴5min，然后立即加入已预热的37℃的LB恢复培养基中，转入37℃摇床中恢复培养1h，得到菌株1;菌株1涂布于氨苄青霉素抗性的LB固体培养基中,于37℃培养箱中培养12h;取菌株1的菌落接种到LB培养基中，在37℃下培养作为种子液，按照1%接菌量转接在密封小瓶中，37℃培养3h，当OD600达到0.6~0.8时，添加0.5mMIPTG及5mM的柠檬烯底物,并在30℃继续生长24h，即得到待测发酵液；所述测定待测菌株发酵液中紫苏醇的产量的方法为：取发酵液,离心后经0.22µm膜过滤，通过自动进样器将10µL的发酵液样品注入液相色谱仪，进行检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 一种菌株发酵液中紫苏醇的高效液相色谱检测方法

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