申请/专利权人：中国科学院亚热带农业生态研究所

申请日：2022-03-21

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN114717179B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;G01N33/569;G01N33/573

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2022.07.26#实质审查的生效;2022.07.08#公开

摘要：本发明公开了一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，所述方法包括如下步骤：（1）将1‑3mm3山羊胰腺组织清洗后离心，弃上清，然后向离心后的沉淀中添加消化液进行山羊胰腺组织消化处理；（2）终止消化后，离心并弃上清，用原代培养基混匀离心后的沉淀，得山羊胰腺腺泡悬液；（3）依次采用差时消化、差时贴壁及细胞刮取的方式对山羊胰腺腺泡细胞悬液中的山羊胰腺腺泡细胞进行纯化处理；（4）将纯化处理后所得的山羊胰腺腺泡细胞接种至传代培养基中进行传代培养；（5）对传代培养后的山羊胰腺腺泡细胞进行鉴定。

主权项：1.一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将1-3mm3山羊胰腺组织清洗后离心，弃上清，然后向离心后的沉淀中添加消化液进行山羊胰腺组织消化处理；所述沉淀与消化液的质量体积比为1g10mL；所述消化液由DMEMF12培养基中添加胶原酶Ⅳ和EGTA配制而成，所述胶原酶Ⅳ在DMEMF12培养基中的浓度为1mgmL，所述EGTA在DMEMF12培养基中的浓度为0.001molmL；所述消化处理是于37℃、80rpmmin条件下摇床消化时间为20min；（2）终止消化后，离心并弃上清，用原代培养基混匀离心后的沉淀，得山羊胰腺腺泡悬液，离心条件是600gmin离心5min并重复两次；所述沉淀与原代培养基的质量体积比为1g5mL；所述原代培养基由DMEMF12培养基中添加FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF配制而成，所述FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF在DMEMF12培养基中的浓度或体积百分比浓度分别为：10%、10%、2.5μgmL、2.5μgmL、10μgmL和10ngmL；（3）依次采用差时消化、差时贴壁及细胞刮取的方式对山羊胰腺腺泡细胞悬液中的山羊胰腺腺泡细胞进行纯化处理；（4）将纯化处理后所得的山羊胰腺腺泡细胞接种至传代培养基中进行传代培养；所述传代培养基由DMEMF12培养基中添加FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF配制而成，所述FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF在DMEMF12培养基中的浓度或体积百分比浓度分别为：10%、2%、2.5μgmL、2.5μgmL、10μgmL和10ngmL；（5）对传代培养后的山羊胰腺腺泡细胞进行鉴定：利用CPA1抗体作为一抗识别山羊腺泡细胞中的CPA1，再用带荧光的二抗与一抗结合来显示CPA1蛋白。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院亚热带农业生态研究所 一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法

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