申请/专利权人：临沂大学;山东江正生物技术有限公司

申请日：2023-12-25

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117736253A

主分类号：C07J9/00

分类号：C07J9/00;C12P33/00;C12R1/245;C12R1/25

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开一种从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法，属于化学药品原料药、制剂制造技术领域。本发明筛选两株产活性胆盐水解酶的微生物菌株，两者等比例混合发酵后，快速产生高活性的胆盐水解酶，可将动物胆汁中的结合态形式胆盐高效的解离为游离态形式，更利于后续鹅去氧胆酸的分离和纯化。本发明工艺方法简单易操作，可以用作药学研究机构对其进行生物活性，以及毒理药理研究。

主权项：1.一种从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：1制备微生物菌液：将两种微生物菌株活化后，分别接种到LB液体培养基中，35-37℃、180rpm-200rpm下培养10-12h，得到两种菌的种子液；2将两种菌的种子液按照体积比1:1混合后，取10mL混合菌液接种到100mL液体发酵培养基中，混合培养24-36h，培养完成将发酵液于4℃-6℃冷冻离心收集沉淀，用无菌生理盐水洗涤沉淀，再离心得到菌体沉淀，加磷酸缓冲液制成OD600为1.0-1.5的菌悬液，将菌悬液在冰浴中超声破碎，得到粗酶液；3胆汁预处理：取动物胆汁，按照胆汁量体积添加粗酶液5-10mLL，混合均匀，在35-37℃下，反应3-5h，得到预处理胆汁液；4将预处理胆汁液中加入乙酸丁酯，混合均匀静置分层，取乙酸丁酯层，再加入碱液进行萃取，下层溶液用酸液调节pH为3-4，此时，胆酸类物质形成沉淀析出，过滤去除废水，收集固体，水洗干燥，得鹅去氧胆酸粗品；5纯化：将得到的鹅去氧胆酸粗品，加入二氯甲烷，二氯甲烷用量与鹅去氧胆酸粗品的固液比为9-11mL：1g，升温搅拌，回流反应0.5-1小时，缓慢降温至0-5℃，搅拌结晶1-2小时，过滤，得鹅去氧胆酸精品。

全文数据：

权利要求：

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