申请/专利权人：南京师范大学

申请日：2022-04-21

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN114807012B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;A01K61/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：本发明公开了一种暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法。本发明的技术方案中，首先在暗纹东方鲀养殖过程中投喂经抗生素处理过的饲料；其次选取暗纹东方鲀肠道中肠部位；然后通过优化暗纹东方鲀肠上皮细胞高效分离培养技术和细胞原代培养条件，得到了纯度较高、生长良好的暗纹东方鲀肠上皮细胞；最后利用皮质醇刺激暗纹东方鲀肠上皮细胞以建立氧化应激模型。本发明为暗纹东方鲀应用于发育生物学、免疫学、毒理与环境检测等方面的研究提供有力的研究材料。

主权项：1.一种暗纹东方鲀肠上皮细胞分离培养及应激模型建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将暗纹东方鲀幼鱼在盐水中养殖7-10d，期间投喂含新霉素和氨苄青霉素饲料，幼鱼取样前禁食；步骤2、幼鱼取样麻醉后无菌解剖摘取中段肠道，置于自配的清洗液中，去除肠系膜，纵向剪开肠道，刮去内容物，用自配的清洗液清洗2-3遍，放入无菌离心管中剪成体积为0.5～0.8mm3肠组织块，自配清洗液的配方如下： 上述清洗液经微孔滤膜过滤除菌，即得；步骤3、向肠组织块中加入0.5～1ml胶原酶Ⅳ消化液，金属浴消化，每隔5～10min取出吹打一次，加入提前配好28℃预温过的完全培养基终止消化，100目筛网过滤后于1000rpm，低温离心后向沉淀中加适量完全培养基，用移液枪反复轻轻吹打混匀，补足完全培养基后进行培养，完全培养基成分为DMEM+胎牛血清+暗纹东方鲀血清，三者比例关系为15～16：2～4：1～2，每100ml培养液中加入400-500μl双抗溶液，双抗溶液包括青霉素100Unitsml、链霉素100μgml；步骤4、培养后吸除培养基，添加含皮质醇的完全培养基刺激肠上皮细胞24h建立氧化应激模型，所述皮质醇浓度为80～120nmolL。

全文数据：

权利要求：

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