申请/专利权人：金宇保灵生物药品有限公司

申请日：2023-11-15

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802032A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N7/00;A61P31/14;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.02#公开

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一株全悬浮无血清型ST细胞及其驯化方法与应用。本发明方法包括：将待驯化ST细胞先以含丙酮酸钠和胎牛血清的DMEM培养基培养，之后以逐渐降低胎牛血清含量的培养基进行降血清驯化培养，获得待悬浮驯化ST细胞；将其以无血清培养基进行连续传代悬浮驯化培养；若出现了5～8个以上的ST细胞结为一团并且ST细胞出现挂壁情况时，则添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速；若情况无改善，则以胰酶对结团细胞进行多次消化；若存在不易消化的细胞团，则采用过细胞筛的方法进行处理。本发明驯化后的ST悬浮细胞可应用于猪丁型冠状病毒的培养和后续疫苗的制备。

主权项：1.一种全悬浮无血清型ST细胞的驯化方法，其特征在于，包括：1将待驯化ST细胞先以含0.8-1.2％丙酮酸钠和9-11％胎牛血清的DMEM培养基培养，之后以丙酮酸钠含量不变并逐渐降低胎牛血清含量的培养基进行降血清驯化培养，直至待驯化ST细胞可在胎牛血清含量相比初始降低了80％的培养基中稳定增殖，获得待悬浮驯化ST细胞；2将所述待悬浮驯化ST细胞在旋转下以无血清培养基进行连续传代悬浮驯化培养，直到获得的ST悬浮细胞的倍增时间为24h，并且有95％以上的细胞为单个或者正在分裂的2个细胞；在悬浮驯化培养中，若出现了5～8个以上的ST细胞结为一团，并且ST细胞出现挂壁情况时，则添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速；若添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速后，细胞结团现象没有改善且仍然出现挂壁情况，则以胰酶对结团细胞进行多次消化，使得结团细胞逐渐解离；若以胰酶消化时，存在不易消化的细胞团，则采用过细胞筛的方法对不易消化的细胞团进行处理，获得过筛后的细胞；最终消化或进一步过筛后，悬浮驯化的细胞有90％以上呈现单个或者2-3个细胞的均匀分散状态。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 金宇保灵生物药品有限公司 一株全悬浮无血清型ST细胞及其驯化方法与应用

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