申请/专利权人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

申请日：2024-01-08

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117805283A

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种乳制品中磷脂成分的分离鉴定方法，涉及食品检验分析技术领域。使用固相萃取和HILIC也称亲水作用色谱超高效液相色谱分离，高分辨飞行时间质谱迭代采集的方法，首次在乳制品中确定了超过500个磷脂分子。另外，依据磷脂亚类和不饱和度在正负模式下提供的拟合方程，可用于依据本发明内容实施开展乳制品磷脂的成分分析，其主要原理是依据磷脂在HILIC的保留行为，同一亚类相对集中的在一段时间内被洗脱，并且保留时间随着碳数的减少和双键数的增多而增大。本发明为乳制品磷脂成分分析提供了一定的科学依据。

主权项：1.一种乳制品中磷脂成分的分离鉴定方法，其特征在于，其包括如下步骤：i提取分离乳制品中的磷脂组分；ii采用高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱获取乳制品中的磷脂质谱信息，鉴定乳制品中磷脂的组成；所述步骤i中，提取分离方法包括：每0.1-2mL或0.1-2g待分离鉴定乳制品与4-10mL含0.2％vv甲酸的二氯甲烷甲醇溶液、1mL水混合，所述二氯甲烷甲醇溶液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1-2:1；然后离心，取有机相吹干后用二氯甲烷-甲醇溶液复溶；然后进行磷脂的分离：将二氯甲烷甲醇溶液复溶物上样至固相载体上，依次采用正己烷、异丙醇二氯甲烷对固相载体进行淋洗，然后用甲醇对固相载体进行洗脱，洗脱相吹干后复溶；所述步骤ii中，超高效液相色谱的方法如下：柱温为40℃；进样量为2～5μL；正离子模式和负离子模式均使用相同流动相，流动相A为：含有0.1～0.2％甲酸和10～15mM甲酸铵的乙腈水溶液，所述流动相A中乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为25:75～20:80；流动相B为：含有0.1-0.2％甲酸和10-15mM甲酸铵的乙腈水溶液，所述流动相B中乙腈与水的体积比为95:5；色谱分离正式开始前使用99％流动相B平衡色谱柱30min；第0min，99％流动相B；到第6min，流动相B降至94％；到第11min，流动相B降至92％；到第16min，流动相B降至88％并维持4min；然后进行柱冲洗和柱平衡；洗脱梯度的流速为0.2-0.3mLmin；所述步骤ii中，高分辨飞行时间质谱采用电喷雾离子源；一级质谱采集质量范围100-200至1200-1600Da，二级质谱采集质量范围50-100至900-1200Da；正离子模式碰撞能为20-30eV；负离子模式碰撞能为25-30eV；气体温度250℃，鞘气温度300℃；鞘气流速12Lmin；毛细管电压正离子模式3000V、负离子模式3000V；碎裂电压150V；锥孔电压65V；MS和MSMS最小采集速率3spectras；每个循环最大采集4个母离子，启用动态排除，重复一次，然后排除0.05min；Iterative模式Masserrortolerance+-20ppm,RTexclusiontolerance+-0.1min；迭代次数为1-4次。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种乳制品中磷脂成分的分离鉴定方法

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