申请/专利权人：北京积水潭医院

申请日：2022-08-10

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN115232787B

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775;C12N5/077;C12N5/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.11.11#实质审查的生效;2022.10.25#公开

摘要：本发明公开了一种基于脱细胞基质三维支架培养的细胞外泌体的制备方法，属于组织工程再生医学领域。本发明提供的外泌体的制备方法，包括如下步骤：将间充质干细胞接种在脱细胞基质三维支架上，进行培养，之后分离得到外泌体。本发明以脱细胞基质为原料，从材料成分和空间结构两个方面构建仿生天然的细胞生长微环境，可进一步优化外泌体的生物学功能，充分发挥外泌体的治疗潜能。

主权项：1.一种外泌体的制备方法，包括如下步骤：将间充质干细胞接种在脱细胞基质三维支架上，进行培养，之后分离得到外泌体；所述脱细胞基质三维支架以所述脱细胞基质为打印墨水通过低温沉积3D打印得到；所述低温的温度范围为-10～-80℃；具体步骤如下：将所述脱细胞基质置于3D打印机料筒中，通过活塞挤压的方式进行挤出打印，挤出的脱细胞软骨基质会在冷冻平台上迅速固化成型，得到支架；打印完成后，将支架放入到冷冻干燥机中升华干燥；将升华干燥后的支架放入交联剂中进行交联；所述交联剂为含有乙基-二甲基胺-丙基碳化二亚胺与n-羟基琥珀酰亚胺的体积百分浓度95％乙醇溶液，其中，乙基-二甲基胺-丙基碳化二亚胺的浓度为50mmolL；n-羟基琥珀酰亚胺的浓度为20mmolL；交联后用PBS缓冲液浸泡2h，去除多余的交联剂；三蒸水漂洗后，再次冷冻干燥升华处理，得到脱细胞基质三维支架；所述脱细胞基质由包括如下步骤的方法制备得到：1将动物组织进行脱细胞处理，得到脱细胞基质匀浆；所述动物组织为软骨组织；2在所述脱细胞基质匀浆中加入乙酸溶液，搅拌，然后让部分乙酸挥发，得到所述脱细胞基质；所述乙酸溶液为不断滴加到所述脱细胞基质匀浆中，直至所述脱细胞基质匀浆由乳白色变为透明状为止；所述搅拌的温度为0～8℃，时间为12～72h；所述乙酸挥发的方法为在抽风机下磁力搅拌挥发乙酸；所述脱细胞基质的质量百分浓度为5～10％。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京积水潭医院 一种基于脱细胞基质三维支架培养的细胞外泌体的制备方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD