申请/专利权人：瑞泽恩制药公司

申请日：2022-07-11

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117836433A

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;G01N30/88;G01N33/569;B01D15/18;G01N30/96;G01N30/34

优先权：["20210712 US 63/220,651","20211103 US 63/275,138","20220708 US 63/359,554","20220708 US 63/359,557"]

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.05#公开

摘要：本发明公开了用于测定重组AAV颗粒的样品中的完整腺相关病毒AAV衣壳组分的相对丰度的方法。在实施方案中，所述方法包括系统再生过程，所述系统再生过程最大限度地减少或消除假峰的存在，以使分析准确性最大化并且确保产物质量和一致性。

主权项：1.一种用于测定包含异源性核酸分子的腺相关病毒AAV颗粒的样品中的完整病毒衣壳组分的相对丰度的方法，所述方法包括：a对液相色谱系统进行系统再生过程，所述液相色谱系统包括液相色谱LC仪器和阴离子交换柱AEX柱，其中所述系统再生过程包括：i用至少10倍柱体积CV的流动相A来洗涤所述AEX柱；ii用至少10CV的纯化水来洗涤所述AEX柱；iii用至少20CV的洗涤溶液来洗涤所述AEX柱，所述洗涤溶液包含15％至21％vv乙醇的纯化水溶液；以及iv用所述洗涤溶液以至少0.5mLmin的流速来洗涤所述LC仪器的载液组件至少30分钟，其中流动相A包含15mM至25mM1,3-双三羟甲基甲基氨基丙烷和1mM至3mM氯化镁的纯化水溶液，pH为8至9，并且其中所述纯化水具有在25℃处约18.2Mohm.cm的电阻率并且具有小于5ppb的总有机碳；b对所述液相色谱系统进行系统平衡过程，包括将所述洗涤溶液从所述LC仪器和所述AEX柱的所述载液组件中清除；c进行样品分离过程，其中所述样品分离过程包括：i将一个或多个空白样品引入所述液相色谱系统，以及使流动相A、流动相B和流动相C的分离梯度运行通过所述液相色谱系统；ii将一个或多个参考标准样品引入所述液相色谱系统，以及使流动相A、流动相B和流动相C的分离梯度运行通过所述液相色谱系统；以及iii将所述AAV颗粒的一个或多个测试样品引入所述液相色谱系统，其中所述一个或多个测试样品包含溶于样品溶液的完整空AAV衣壳和完整完全AAV衣壳，以及使流动相A、流动相B和流动相C的分离梯度运行通过所述液相色谱系统，以分离所述完整空AAV衣壳与所述完整完全AAV衣壳，其中流动相B包含15mM至25mM1,3-双三羟甲基甲基氨基丙烷、250mM至1M四甲基氯化铵TMAC和1mM至3mM氯化镁的纯化水溶液，pH为8至9，并且流动相C包含1.5M至2.5M氯化钠的纯化水溶液；以及d鉴定所述一个或多个测试样品中的每个测试样品中的所述完整空AAV衣壳的量和所述完整完全AAV衣壳的量，以测定所述AAV颗粒的所述样品中的所述完整病毒衣壳组分的相对丰度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 瑞泽恩制药公司 用于测定AAV衣壳比率的液相色谱测定

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