申请/专利权人：合肥工业大学

申请日：2024-01-02

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117825364A

主分类号：G01N21/78

分类号：G01N21/78;G01N21/33;C12Q1/6834;C12Q1/682;C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.05#公开

摘要：本发明公开了一种实时可见光比色PCR可视化定量检测掺假肉的方法。所述方法包括：提取肉制品中的DNA并进行PCR扩增；以表面修饰有第二连接物的磁珠提取PCR扩增的目标双链DNA产物；将表面结合有目标双链DNA的磁珠重悬于杂交缓冲液中，并对目标双链DNA进行解链处理获得样品液；向样品液中依次加入特异性检测探针、比色探针进行杂交获得检测液；向所述检测液中加入4‑硝基苯酚和硼氢化钠形成反应体系，通过观测所述反应体系的颜色变化或者检测所述反应体系在380～430nm处的紫外可见吸收值变化，实现对肉制品中掺假肉的检测。本发明提供的检测方法具有较高的灵敏度和选择性，为生物分析和医学检测提供了新的检测手段。

主权项：1.一种实时可见光比色PCR可视化定量检测掺假肉的方法，其特征在于包括：1提取肉制品中的DNA并进行PCR扩增，所述PCR扩增中采用的引物对包括上游引物和下游引物，且所述上游引物或下游引物是被第一连接物标记的；2以表面修饰有第二连接物的磁珠提取所述PCR扩增的目标双链DNA产物，所述第一连接物与第二连接物能特异性结合；3将表面结合有目标双链DNA的磁珠重悬于杂交缓冲液中，并对目标双链DNA进行解链处理，之后分离出表面结合有目标单链DNA的磁珠，经清洗后重悬于杂交缓冲液中，获得样品液；4向所述样品液中依次加入特异性检测探针、比色探针，所述比色探针包括不同粒径的金纳米粒子和基于Au-S键结合在金纳米粒子表面的通用标记探针，使目标单链DNA与特异性检测探针的一部分序列杂交结合，以及，使特异性检测探针的另一部分序列与所述通用标记探针杂交结合，从而在磁珠表面连接金纳米粒子，之后分离出表面连接有金纳米粒子的磁珠，经清洗后重悬于水中，获得检测液；其中，所述比色探针包括第一比色探针及第二比色探针，所述第一比色探针由粒径较大的金纳米粒子与通用标记探针结合获得，所述第二比色探针由粒径较小的金纳米粒子与通用标记探针结合获得；5向所述检测液中加入4-硝基苯酚和硼氢化钠形成反应体系，通过观测所述反应体系的颜色变化或者检测所述反应体系在380～430处的紫外可见吸收值变化，实现对肉制品中掺假肉的检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合肥工业大学 一种实时可见光比色PCR可视化定量检测掺假肉的方法

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