申请/专利权人：艾米能斯(苏州)生物科技有限公司

申请日：2020-04-22

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN111471644B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071

优先权：["20200420 CN 2020103116518"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2021.09.28#著录事项变更;2020.08.25#实质审查的生效;2020.07.31#公开

摘要：本发明公开一种CHOK1悬浮驯化无血清培养基及悬浮驯化方法，无血清培养基中包含EmCDCHOMedium、Glutamine、HT及抗结团剂，基于该培养基可实现15天完成基本驯化，细胞活率大于95％。自接种至含EmCDCHOMedium的驯化培养基进行摇床悬浮培养至完成基本驯化，再至稳定传代，整个过程仅需24天。

主权项：1.一种CHOK1细胞悬浮驯化方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，贴壁转悬浮：使用F-12K+10%FBS培养细胞，细胞汇合度达到70-80%，加胰酶消化，缓慢吹打混匀，按0.5×106cellsml接种至含10%FBS的F-12K培养基中摇瓶传代，2天后细胞密度达到1×106cellsml，水平离心5±1min收集细胞；步骤2，悬浮驯化恢复：将步骤1中摇瓶传代后收集的细胞以0.5×106cellsml密度接种到CHOK1悬浮驯化无血清培养基，继续摇床悬浮培养，5天后细胞增殖为1.6×106cellsml，细胞活率达到88.88%，直接取悬液以0.5×106cellsml传代，4天后细胞活率为92.6%，接下来取悬液以0.8×106cellsml密度传代，连续传3代后，完成CHOK1细胞基本驯化；接下来以0.3×106cellsml传代，每3天传代一次，连续传3代，细胞倍增时间稳定在23～24h，细胞悬浮驯化完成，细胞活率大于95%；所述CHOK1悬浮驯化无血清培养基包括如下重量组分：EmCDCHOMedium：98%97-98份；Glutamine：6mM0.8-1.2份；HT-1X0.8-1.2份；抗结团剂：0.5%0.4-0.6份；步骤1中摇瓶传代培养条件为于37±0.5℃，5±0.5%CO2，125±5rpm摇床中悬浮培养；步骤1中细胞收集方法为取细胞密度达到1×106cellsml的细胞悬液，水平离心5±1min后，收集细胞沉淀。

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权利要求：

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