申请/专利权人：三亚中国农业科学院国家南繁研究院;中国农业科学院棉花研究所

申请日：2024-03-13

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117867012A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/55;C12Q1/6869;C12Q1/6895;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及提高基因编辑检测灵敏度的报告质粒及检测方法和应用。本发明提供了一对包含丝氨酸重组系统和CRISPRCas系统的双质粒。两个质粒共转化进入原生质体细胞，重组酶将两个质粒重组为单质粒并激活Cas蛋白，对靶点进行编辑。将待检测靶点的同源序列提前克隆到其中一个质粒中，通过分别位于两个质粒上的特异性引物即可特异性富集质粒重组后的待检测靶点，有效剔除了未转化细胞、低活性细胞和高浓度质粒等带来的检测背景。该发明属于基因编辑研究的底层检测方法，可替代基于荧光蛋白的细胞分选技术进行下游应用，且简单有效。不仅可以用于检测微量编辑事件，优化基因编辑工具，同样可以用于各种新型基因编辑工具的从头开发。

主权项：1.提高瞬时表达系统基因编辑检测灵敏度的报告质粒，其特征在于，所述报告质粒由pRASN和pRASC组成；所述pRASN的功能元件依次为：Cas9的启动子35S、N端Cas9与其无缝连接的N端内含子、attB重组位点、待检测靶点同源序列、特异性引物序列和完整的sgRNA表达框；所述待检测靶点同源序列为待检测内源基因靶点位置的同源片段；所述pRASC的功能元件依次为：完整的Bxb1重组酶表达框、attP位点、C端内含子及与其无缝连接的C端Cas9和终止子；所述pRASC的功能元件还包括特异性引物序列；所述异性引物序列位于完整的Bxb1重组酶表达框与终止子之间任意位置。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院;中国农业科学院棉花研究所 提高基因编辑检测灵敏度的报告质粒及检测方法和应用

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