申请/专利权人：大连民族大学

申请日：2023-12-22

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117867015A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H5/02;A01H6/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明属于林木基因工程技术领域，公开了一种农杆菌介导浸花的沙棘遗传转化方法。包括花枝选择、农杆菌的活化和培养、农杆菌转化液的制备、侵染沙棘植株、mCherry荧光检测、mCherry表达量检测。利用含mCherry报告基因的农杆菌LBA4404菌液浸染沙棘授粉后雌花花序，获得转基因果实，不仅可以大大缩短转化周期，实验结果通过荧光观察也比较直观，且能够长期稳定表达，为沙棘基因功能验证提供了一种快速可靠的方法，同时可以为培养转基因沙棘新品种奠定基础。

主权项：1.一种农杆菌介导浸花的沙棘遗传转化方法，其特征在于，步骤包括：S1.花枝选择：取长度40-60cm，无病虫害、授粉期间雌花饱满的沙棘枝条；S2.农杆菌的活化和培养：提取带有mCherry报告基因的质粒并转入农杆菌中，在含有链霉素、利福平和卡那霉素的YEB液体培养基中培养，其中mCherry报告基因序列如SEQIDNO.1所示；S3.农杆菌转化液的制备：将培养好含有pCAMBIA-1300-mCherry表达载体的农杆菌菌液离心后用缓冲液重悬菌体；S4.侵染沙棘植株：将含有花序的沙棘枝条在重悬菌液中浸染10-15分钟；20-24℃暗培养2-3天后正常培养，3个月后收集成熟果实；S5.mCherry荧光检测：使用LUYOR-3415RG手持式荧光观测仪进行观测；S6.mCherry表达量检测：提取果实总RNA，使用qRT-pCR分析mCherry基因的表达量变化情况。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 大连民族大学 一种农杆菌介导浸花的沙棘遗传转化方法

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