申请/专利权人：北京镁伽科技有限公司

申请日：2021-12-20

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114350615B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/85;C12N15/65;C12N9/22;C12N15/113;C12N15/867;C12N7/00;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.05.03#实质审查的生效;2022.04.15#公开

摘要：本发明涉及生物学及遗传学技术领域，公开了一株STAT2基因缺失细胞株及其制备方法和应用。本发明选用HEK293细胞建立稳定细胞株，其具有产毒量高、无致瘤性的优点，而且节约了病毒生产、制备的时间，提高病毒回收效率，降低了生产成本。本发明利用CRISPRCas9技术对细胞的STAT2基因进行特异性靶向敲除获得STAT2基因缺失的细胞株，方法简单，可复制性强，敲除效率极高，在优选的实施方案中，通过利用含有报告载体的基因敲除系统，能够快速直观的筛选目标细胞。

主权项：1.一种构建STAT2基因缺失细胞株的方法，其特征在于，该方法包括：（1）使用STAT2基因敲除用的载体系统转染目标细胞，得到转染后的目标细胞；（2）将所述转染后的目标细胞进行单克隆筛选得到单克隆，将所述单克隆进行PCR鉴定，得到阳性克隆；（3）将所述阳性克隆进行扩大培养，得到STAT2基因缺失细胞株；其中，所述载体系统包括表达载体，所述表达载体能够表达Cas9、sgRNA1和sgRNA2；所述载体系统还包括报告载体，步骤（2）所述单克隆筛选为阳性单克隆筛选；所述报告载体含有启动子、荧光蛋白表达元件与位于启动子和荧光蛋白表达元件之间的sgRNA1靶序列-转录终止序列-sgRNA2靶序列元件；所述sgRNA1靶序列-转录终止序列-sgRNA2靶序列元件的序列如SEQIDNO:12所示；所述目标细胞为HEK293细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京镁伽科技有限公司 STAT2基因缺失细胞株及其制备方法和应用

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