申请/专利权人：国玺干细胞应用技术股份有限公司

申请日：2021-01-25

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN113736725B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/0775

优先权：["20200529 US 63/031,596"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2021.12.21#实质审查的生效;2021.12.03#公开

摘要：本发明提供一种细胞分化培养基组合物、高分泌量胰岛素产生细胞及制备。所述组合物为至少包括葡萄糖、烟碱酰胺、活化素‑A、胰高血糖素样肽‑4、肝细胞生长因子、五肽胃泌素、B‑27无血清补充剂及N‑2补充剂的无血清DMEMF12培养基。本发明还公开了高分泌量胰岛素产生细胞及其制备方法。利用所述细胞分化培养基组合物以特定条件诱导干细胞分化所得到的高分泌量胰岛素产生细胞能够在短时间内分泌出大量的胰岛素，而当将所述高分泌量胰岛素产生细胞移植至人体内时也不易被巨噬细胞所吞噬，能够延续胰岛素分泌的时间并且在移植至人体内部时可避免被体内的巨噬细胞吞噬，具有优异的体内存活率。

主权项：1.一种高分泌量胰岛素产生细胞的制备方法，其特征在于，包括：a细胞贴附步骤：将含有干细胞的溶液倒入一培养容器中，静置至少24小时，使贴附于所述培养容器的周壁上的所述干细胞的数量为在6,000至15,000个细胞cm2之间；b细胞分化步骤：从所述培养容器中移除液体后，再投入一细胞分化培养基组合物，在环境温度为35.5~39.5℃、CO2浓度为5%的条件下进行培养，以使干细胞诱导分化成一高分泌量胰岛素产生细胞，在进行培养至少2天后收集所述高分泌量胰岛素产生细胞；其中，所述细胞分化培养基组合物为一无血清DMEMF12培养基，且其组分和浓度为：5~25mM的葡萄糖、5~15mM的烟碱酰胺、1~10pM的活化素-A、5~20nM的胰高血糖素样肽-4、80~120fM的肝细胞生长因子、5~20nM的五肽胃泌素、0.1~5%的B-27无血清补充剂及0.1~5%的N-2补充剂；所述高分泌量胰岛素产生细胞的外观形态为纺缍状，且带有胰岛素基因insulingene、IPF-1基因、ISL-1基因、以及与所述干细胞相同的表面标志；所述高分泌量胰岛素产生细胞的胰岛素分泌量为：每10万个细胞每天至少分泌1,000mIUL以上的胰岛素。

全文数据：

权利要求：

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