申请/专利权人：杏林医学科技(江苏)有限公司

申请日：2024-01-19

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117904034A

主分类号：C12N5/0735

分类号：C12N5/0735;A61L27/38;A61L27/20;A61L27/50;A61L27/52;A61L27/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本发明提出一种自体干细胞培养液及其在修复女性生殖器官凝胶上的应用。女性生殖系统器官及组织结构的完整和功能的正常对于女性健康至关重要，本发明选择在完全培养基中加入改性枸杞多糖、改性黄芪甲苷、血红蛋白，转铁蛋白和成纤维细胞生长因子，培养基中加入的血红蛋白，转铁蛋白和成纤维生长因子，与改性枸杞多糖和改性黄芪甲苷协同促进干细胞的增殖，并延缓干细胞在培养过程中的老化现象。最后，将甲基丙烯酸改性透明质酸水凝胶能够有效建立一个免疫隔离屏障，显著增强移植外泌体的稳定性，提供了一种高效且有效的方式来维持外泌体的生物活性，使制备的水凝胶弹性高、透气性好、无毒，在修复女性生殖器官上具有良好的效果。

主权项：1.自体干细胞培养液，其特征在于：具体制备步骤如下：S1、改性枸杞多糖：取枸杞多糖0.2～0.8g加入适量水溶解，用0.5molLNaOH溶液调节pH至9～10，边搅边分批量加入乙酸酐试剂，始终维持pH在8～10范围内，恒温反应一段时间，反应完毕后，用0.5molLHCl调节pH为7～8，之后将溶液转入3000Da的透析袋中，透析40～50h，经真空冷冻干燥即为改性的枸杞多糖；S2、改性黄芪甲苷：称取黄芪甲苷10～20g，将其与0.4～0.5gmL魔芋胶和溶于体积分数为3％的冰醋酸溶液中的10～20g壳聚糖相混合，置于50～60℃鼓风干燥箱中烘干2～4h，得到改性的黄芪甲苷；S3、完全培养基配置：使用超速离心机将血清在4℃下以120000rmin超速离心12h，以制备不含外泌体的血清；在生物安全柜中将90～95mL不含外泌体的血清和5～10mL抗菌素加入400mL低糖改良伊格尔培养基中，再添加步骤S1制备的改性枸杞多糖、步骤S2制备的改性黄芪甲苷搅拌均匀50～60min，再将血红蛋白，转铁蛋白和成纤维细胞生长因子加入并搅拌均匀20～30min，最后加入维生素D，其中抗菌素中含青霉素、链霉素、两性霉素B，其相应质量比为1：10：2，改性枸杞多糖、改性黄芪甲苷、血红蛋白、转铁蛋白、成纤维细胞生长因子和维生素D质量比为8：4：3：1：1：1，其中维生素D加入的质量为10g；混匀后置于2～8℃冰箱中，即得自体干细胞培养液。

全文数据：

权利要求：

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