申请/专利权人：基因组股份公司

申请日：2014-10-03

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117904018A

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N9/04;C12P7/24;C12P7/18

优先权：["20131004 US 61/887,251"]

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本申请描述了非天然NAD+‑依赖性醇脱氢酶ADHs，其与未修饰的对应物相比，能够令甲醇或乙醇向甲醛或乙醛的分别转化提高到至少2倍。还描述了编码所述非天然醇脱氢酶的核酸，和包括所述核酸的表达构建体，以及包括所述核酸或表达构建体的工程细胞。还表述了表达非天然NAD+‑依赖性醇脱氢酶的工程细胞，可选地包括一种或多种额外的代谢途径转基因、甲醇代谢途径基因、目标产物途径基因、包括所述细胞的细胞培养物组合物、用于提高所述目标产物或其中间体从细胞的生产的方法、包括所述目标产物或其中间体的组合物，和从所述目标产物或其中间体制得的产物。

主权项：1.一种工程细胞，a所述工程细胞表达非天然醇脱氢酶，所述非天然醇脱氢酶的序列基于选自SEQIDNO.1、5、7、9、11、13、15、17、19、21、25、29、31、33、35、37、43、45、47、49、53、55、57、59、61、63、65、67或69的醇脱氢酶模板；其中所述非天然醇脱氢酶包括一个或多个基于式R1XR2的氨基酸置换，其中所述R1是在所述模板的位置X上的原始氨基酸，且所述R2是在所述模板上对应于X的位置上置换R1的变体氨基酸，其中，所述XR2选自以下组中的各项：11T、38N、42Q、48D、53I、56K、60E、61A、63F、65Q、70N、71I、71T、71V、74S、81G、84R、86K、87K、94V、99P、99T、103V、106L、107S、108V、108W、109Y、112K、112R、115H、116F、117D、117Q、117Y、120H、120R、121A、121D、121E、121L、121M、121R、121S、121T、121V、121W、121Y、122A、122P、123D、123I、123L、123R、123Y、124I、124L、124R、125C、125G、125W、126G、126V、127C、127R、128A、128R、128S、129A、129M、129P、129S、130F、130I、130Y、134T、143T、145M、146N、147R、148A、148F、148G、148I、148T、148V、148W、149L、149M、149T、149V、150A、150I、152M、155V、157N、158E、158H、158K、158W、161A、161G、161Q、161S、161V、163F、163N、163Q、163T、164G、164N、165G、181R、184T、186M、190A、190S、199V、217K、226M、256C、267H、269S、270M、270S、270Y、296S、298H、300T、302V、312V、316V、323M、333L、336L、337C、343D、344A、344G、345E、350K、354M、355D、355I、355K、358G、360A、360G、360K、360R、360S、361N、361R、363K和379M，其中所述脱氢酶任选地包含在模板上相对于SEQIDNO:1的以下R1X的一个或多个位置的氨基酸置换：T2、N4、P9、V18、R24、T44、L46、K52、E56、D60、A62、F64、A67、P71、A72、D73、T74、E78、V80、K84、Q85、E86、I106、V109、R115、I116、N117、V122、K127、I135、T136、S154、A155、R156、P161、V162、I163、P169、T170、V171、V174、L178、M179、A184、G185、L186、A189、T190、A194、A198、Y202、V203、T211、F214、I216、Q217、K220、L221、N223、Y225、A229、E237、E240、Y244、A245、M248、A252、N254、H266、G270、Y272、I278、M284、H286、V287、N291、I293、A294、R298、H301、I302、L305、N309、A311、G312、T315、A317、R321、V324、E327、I329、S332、S337、E341、M342、K345、E347、K354、N355、A356、Y357、T370、A375和I378。

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