申请/专利权人：浙江中医药大学

申请日：2023-12-22

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117904346A

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/6806;C12N15/11;C12R1/77

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.19#公开

摘要：本发明公开了一种尖孢镰刀菌番茄专化型CRISPR一管法检测体系，S1、构建含有尖孢镰刀菌番茄专化型Fol_SIX1保守序列的质粒pUC57‑Fol_SIX1；S2、将pUC57‑Fol_SIX1质粒与模板DNA结合，构建CRISPR‑Cas蛋白和sgRNA；S3、将CRISPR‑Cas蛋白和sgRNA通过体外转录与纯化，制备Cas12bsgRNA；S4、将Cas12bsgRNA与模板DNA结合，构建Cas12bsgRNA与Fol_SIX1‑sgRNA的双链RNA分子；S5、将双链RNA分子导入细胞，进行Cas12bsgRNA的体外转录与纯化；S6、将转录产物进行定量PCR检测，筛选出最佳的LAMP引物；S7、将最佳的LAMP引物与模板DNA结合，进行CRISPR一管法检测体系的建立；S8、将CRISPR一管法检测体系应用于尖孢镰刀菌番茄专化型CRISPR一管法检测实验，检测快速、操作便捷，且具有较高的检测灵敏度。

主权项：1.一种尖孢镰刀菌番茄检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建含有尖孢镰刀菌番茄专化型Fol_SIX1保守序列的质粒pUC57-Fol_SIX1；S2、将pUC57-Fol_SIX1质粒与模板DNA结合，构建CRISPR-Cas蛋白和sgRNA；S3、将CRISPR-Cas蛋白和sgRNA通过体外转录与纯化，制备Cas12bsgRNA；S4、将Cas12bsgRNA与模板DNA结合，构建Cas12bsgRNA与Fol_SIX1-sgRNA的双链RNA分子；S5、将双链RNA分子导入细胞，进行Cas12bsgRNA的体外转录与纯化；S6、将转录产物进行定量PCR检测，筛选出最佳的LAMP引物；S7、将最佳的LAMP引物与模板DNA结合，进行CRISPR一管法检测体系的建立；S8、将CRISPR一管法检测体系应用于尖孢镰刀菌番茄专化型CRISPR一管法检测实验。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江中医药大学 一种尖孢镰刀菌番茄专化型CRISPR一管法检测体系

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD