申请/专利权人：成都中医药大学附属医院(四川省中医医院)

申请日：2024-03-08

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117898257A

主分类号：A01K67/0271

分类号：A01K67/0271;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12;A61K49/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体来说是一种基于3D类器官联合基因编辑构建肺结癌转化动物模型的方法，取Trp53基因缺失的小鼠正常肺上皮类器官培养，提取小鼠肺组织并构建含有K‑ras目的基因表达载体后提取质粒，采用磷酸钙转染法包装逆转录病毒，转录病毒进行类器官感染，成功的类器官按1：3的比例进行传代扩增，鉴定后制备类器官悬液在10秒内将300,000个75μL的细胞注射到小鼠肺左叶，然后立即进行切口缝合。本发明的技术方案中，用cDNA过表达技术对小鼠肺类器官进行基因编辑后，可以有效和快速地生成在基因组和表型水平上密切模仿人类疾病的发生发展，模型具有稳定性、可控性，能弥补传统动物体内肺结节造模方式存在迟滞性、不可控性等建模技术瓶颈。

主权项：1.肺结癌转化动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法基于3D类器官联合基因编辑构建，具体为：取Trp53基因缺失的小鼠正常肺上皮类器官培养，提取小鼠肺组织并构建含有K-ras目的基因表达载体后提取质粒，采用磷酸钙转染法包装逆转录病毒，利用病毒颗粒对类器官进行感染，将基因编辑成功的类器官按1：3的比例进行传代扩增，将处于对数生长期的类器官进行HE和IHC染色鉴定后制备类器官悬液，在10秒内将300,000个75μL的细胞注射到小鼠肺左叶，然后立即进行切口缝合，术后定期监测小鼠的体重、行为和健康状况，每周通过IVISSpectrum成像系统观察出现肿瘤细胞荧光情况、MicroCT技术观察肺结节大小，在第4、6、10周采集小鼠肺组织进行HE和IHC染色，用于评估肿瘤的生物学特性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 成都中医药大学附属医院(四川省中医医院) 肺结癌转化动物模型的构建方法及应用

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