申请/专利权人：中国科学院深圳先进技术研究院

申请日：2022-03-01

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114591442B

主分类号：C07K19/00

分类号：C07K19/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.06.24#实质审查的生效;2022.06.07#公开

摘要：本发明属于分子生物学技术领域，具体提供了一种受光调控的蛋白酶工具及其配套底物。所述蛋白酶工具包括HIV‑1蛋白酶突变体和Vivid蛋白结构域；所述Vivid蛋白结构域通过柔性肽段与所述HIV‑1蛋白酶突变体进行连接；所述HIV‑1蛋白酶突变体通过对天然条件下介导HIV‑1蛋白酶二聚的氨基酸位点进行突变获得。本发明将蛋白酶工具由异源二聚形式改变为同源二聚形式，在进行细胞实验时所需转入的蛋白酶工具元件由两个减少为一个，缩短蛋白酶工具的氨基酸序列长度，结构更精简。此外，本发明提供的蛋白酶工具与其配套的底物共同使用时，可实现人工信号输入在哺乳动物细胞内信号通路的控制。

主权项：1.一种蛋白酶工具和配套底物，其特征在于：所述蛋白酶工具包括HIV-1蛋白酶突变体和Vivid蛋白；所述Vivid蛋白通过柔性肽段与所述HIV-1蛋白酶突变体进行连接；所述HIV-1蛋白酶突变体通过对天然条件下介导HIV-1蛋白酶二聚的氨基酸位点进行突变获得；所述HIV-1蛋白酶突变体为N98D突变体；其中，所述N98D突变体为将HIV-1蛋白酶第98位的天冬酰胺突变为天冬氨酸的突变体；所述Vivid蛋白为Vivid蛋白I52C突变体；所述Vivid蛋白I52C突变体为将Vivid蛋白第52位异亮氨酸突变为半胱氨酸的突变体；所述Vivid蛋白结构域通过柔性肽段连接在所述HIV-1蛋白酶突变体的C端；所述柔性肽段的氨基酸序列为SGGGSGGGSGGG；所述配套底物包括从N端到C端依次连接的UbR-dK降解标签、蛋白酶工具识别切割位点、目标效应蛋白、蛋白酶工具识别切割位点和4个串联的PEST基序；所述蛋白酶工具识别切割位点的氨基酸序列为VSFNFPQITL；所述目标效应蛋白为荧光蛋白、具有下游转录调控活性的转录因子或对细胞内源信号转导通路具有干扰作用的蛋白激酶中的一种。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院深圳先进技术研究院 一种受光调控的蛋白酶工具及其配套底物

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