申请/专利权人：沈阳细胞治疗工程技术研发中心有限公司

申请日：2020-08-26

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN111944754B

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.05.17#实质审查的生效;2020.11.17#公开

摘要：本发明公开了一种自然杀伤细胞的培养方法：一包被：用Erb‑B2作为包被液预先包被培养容器底部；二培养：用激活培养液A重悬外周血单个核细胞，置于上述预先包被的培养容器中，转移至培养箱中培养；培养第3～5天，补加1～2次活化培养液B，培养第7～8天补加扩增培养液C，之后每2～3天补加一次；共培养14～21天。所述激活培养液A，是由基础培养液、IL‑15、IL‑18、IL‑21、IL‑27和NK细胞外泌体组成的；所述活化培养液B，是由基础培养液和IL‑15组成的；所述扩增培养液C，是由基础培养液和IL‑2组成的。本发明的培养方法，所得NK细胞的比例高，扩增倍数可达210倍，操作简单，能够收获较高比例的NK细胞，提高生产效率和治疗效果。

主权项：1.一种自然杀伤细胞的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：一包被：用Erb-B2酪氨酸激酶受体2作为包被液预先包被培养容器底部；二培养：用激活培养液A重悬外周血单个核细胞PBMC细胞，置于上述预先包被的培养容器中，转移至培养箱中培养；培养第3～5天，补加1～2次活化培养液B，培养第7～8天补加扩增培养液C，之后每2～3天补加一次扩增培养液C；共培养14～21天；所述激活培养液A，是由基础培养液、IL-15、IL-18、IL-21、IL-27和NK细胞外泌体组成的，其中，IL-15的浓度为80～120ngml，IL-18的浓度为80～120ngml，IL-21的浓度为80～120ngml，IL-27的浓度为80～120ngml，NK细胞外泌体的浓度为0.8～1.2×106个ml；所述活化培养液B，是由基础培养液和IL-15组成的，IL-15的浓度为80～120ngml；所述扩增培养液C，是由基础培养液和IL-2组成的，IL-2的浓度为450～550ngml；所述基础培养液选自淋巴细胞无血清培养液。

全文数据：

权利要求：

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