申请/专利权人：天津中医药大学第一附属医院

申请日：2021-09-28

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN113984916B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.02.18#实质审查的生效;2022.01.28#公开

摘要：本发明属于中医药技术领域，尤其是一种正髓丸及正髓丸药材含量测定方法，包括如下重量份数的组分：制附子7‑10份，白附子6‑10份，人参6‑10份，枸杞子5‑10份，滑石5‑10份，青黛4‑5份，甘草3‑5份。该正髓丸及正髓丸药材含量测定方法，制备的正髓丸具有对血液恶性肿瘤骨髓损伤修复的功能，和温阳化痰、益气通络的效果，通过正髓丸药材含量测定方法，该方法稳定、可靠、灵敏、专属性好，适宜进行低含量成分的检测，从而解决了现有的血液恶性肿瘤骨髓损伤进行修复治疗时，具有治疗效果的中药优势更加明显，但是使用过程中，由于中药种类繁多、浩瀚，存在如何确定测定中药中药材含量，适合对血液恶性肿瘤骨髓损伤进行修复的问题。

主权项：1.一种正髓丸的药材含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、色谱条件准备；步骤二、质谱条件准备；步骤三、数据处理与分析；步骤四、化合物相关靶点的收集；步骤五、BSJDTLF提取物指纹图谱建立；步骤六、靶点治疗；步骤七、配制标准曲线；步骤八、样品制备；步骤九、色谱分析；步骤十、质谱分析；步骤十一、方法学验证，完成测定，获得结果；所述步骤一中色谱条件准备，采用ACQUITYUPLCHSST3色谱柱,流动相：A:0.1%甲酸水溶液,D:乙腈,梯度洗脱;流速0.3m·min-1，进样量2μL，柱温35℃；所述步骤二中质谱条件准备，质谱分析在ThermoFisherQ-OrbitrapMS系统下完成，离子源为高能电喷雾离子源，扫描模式为Full-msdd-ms2，正负离子模式下同时采集，源参数：源喷雾电压正离子为3.5kV，负离子为2.8kV，毛细管温度320℃，离子源加热温度350℃，鞘气N2为35，辅助气为10，S-lens水平为50V，碰撞能量为20V，40V，60V，扫描范围为mz100~1500，分辨率为70000；所述步骤三中数据处理与分析，将采集到的原始数据利用Xcalibur软件进行数据记录、分析及处理，所述步骤四中化合物相关靶点的收集，质谱结果中化合物的相关靶点在TCMSP与CTD两个数据库检索得到；所述步骤五中BSJDTLF提取物指纹图谱建立，复方提取物的提取总离子流图，通过准确的分子离子质量及二级碎片进行分析，所述步骤六中靶点治疗，使用TCMSP与CTD数据库检索质谱结果中182个化合物的对应靶点，将这些靶点结果通过Uniprot及DAVID数据库统一基因名称；所述步骤七中配制标准曲线，分别精确称量甜菜碱、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、琥珀酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸、柠檬酸、异甘草素、烟酸、人参皂苷Re除牛磺酸用水溶解外其余全部用纯甲醇溶解，配置成1mgml的母液，将10种化合物混合配制成混合溶液，随后逐级稀释至一系列所需浓度；所述步骤八中样品制备，正髓丹样品每个样品平行称量三份，随后加入1mL甲醇溶解，超声提取30分钟，14000rpmmin离心10分钟，取上清液待检测；所述步骤九中色谱分析，采用仪器：UHPLC-MSUHPLCultimate3000Q-ExativeMSThermo，色谱柱：AcquityuplcHSST31.7μm2.1x100mm，流动相：pumpA：0.1%甲酸水，pumpD：乙腈，进样量：2μl；柱温：35℃； 时间 流速mlmin A0.1%甲酸 D乙腈 0min 0.3 97% 3% 15min 0.3 0% 100% 16min 0.3 0% 100% 16.1min 0.3 100% 3% 17min 0.3 100% 3% 所述步骤十中质谱分析，扫描模式为正负离子Full-MSddms2，毛细管温度为320℃，辅助气温度为350℃，喷雾电压正离子模式为3.0kV，负离子模式为2.8kV，鞘气N2为40arb，辅助气N2为10arb，N2纯度99.9%，碰撞能量NCE为20、40、60V，扫描范围为mz100-1500。

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百度查询： 天津中医药大学第一附属医院 一种正髓丸及正髓丸药材含量测定方法

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