申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2021-07-19

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN113528432B

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.04.15#著录事项变更;2021.11.09#实质审查的生效;2021.10.22#公开

摘要：一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，本发明涉及一种利用miR‑18inhibitor促牛成肌细胞分化的方法，本发明公开了一种新型高效的利用miR‑18inhibitor促牛成肌细胞分化方法，包括牛成肌细胞复苏培养、传代培养以及分化培养技术。本发明通过转染miR‑18抑制剂到牛成肌细胞，培养后利用免疫染色鉴定，荧光定量PCR鉴定等，发现了miR‑18抑制剂有明显促牛成肌细胞分化作用，得到高效率分化结果的方法。本发明应用于促牛成肌细胞分化领域。

主权项：1.一种利用miR-18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于它按以下步骤实现：一、牛成肌细胞传代培养将牛成肌细胞进行复苏培养，培养至70％-80％细胞融合，进行传代培养；其中牛成肌细胞传代培养按照1:2传代；二、配制转染试剂取离心管A和B，A管添加50uLOpti-MEM无血清培养基和1.5uLmiR-18抑制剂预混；B管添加50uLOpti-MEM无血清培养基和1uLRNAiMAX，静置5分钟后，把A管内的试剂混匀后加入B中，吹打3次，常温静置20min，得到转染试剂；三、转染牛成肌细胞传代培养至第三代，进行铺板传代，添加增殖培养基培养24h，然后换为分化培养基，再加入转染试剂进行转染，转染24h后用分化培养基更换12培养基，转染后培养3-7d，即完成利用miR-18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法；其中分化培养基为DMEM-HIGHGLUCOSE培养基+2％马血清+1％双抗+1％谷氨酰胺替代物。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 一种利用miR-18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法

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