申请/专利权人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院

申请日：2023-08-25

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117110625B

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N21/78

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2023.12.12#实质审查的生效;2023.11.24#公开

摘要：本发明属于有机复合材料技术领域，具体涉及一种DNA逻辑门纳米器件在细胞表面蛋白染色中的应用。本发明首先提供一种利用DNA逻辑门纳米器件对细胞表面蛋白进行原位染色的具体方法。所述方法包括合成DNA逻辑门纳米器件，利用该纳米器件底端识别靶蛋白并通过逻辑运算暴露出顶端触发序列，触发形成含有重复G‑四链体结构的DNA纳米纤维，进而催化诱导聚多巴胺的限域氧化沉积，从而对细胞膜表面的靶蛋白进行原位染色。本发明可实现原位对低丰度蛋白的显色。

主权项：1.一种利用DNA逻辑门纳米器件对细胞膜表面蛋白进行原位染色的方法，其特征在于，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的，包括以下步骤：步骤1：将DNA序列1、DNA序列2和DNA序列3通过DNA自组装反应合成DNA纳米三棱柱，所述DNA序列1的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，所述DNA序列2的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，所述DNA序列3的核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；将触发序列、靶蛋白核酸适配体序列与所述DNA纳米三棱柱共孵育，构建出DNA逻辑门纳米器件，所述触发序列的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；步骤2：加入互补序列，所述互补序列与步骤1构建的DNA逻辑门纳米器件上的触发序列以及靶蛋白核酸适配体序列结合，将所述触发序列和靶蛋白核酸适配体序列暂时封闭；步骤3：培养细胞，将细胞与步骤2中的DNA逻辑门纳米器件共孵育，当细胞膜表面存在靶蛋白时，所述靶蛋白核酸适配体序列与靶蛋白结合，触发逻辑门运算以使所述触发序列暴露；步骤4：在步骤3的反应体系中进一步加入发夹序列孵育，所述发夹序列由第1发夹序列、第2发夹序列和第3发夹序列组成，所述第1发夹序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述第2发夹序列的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述第3发夹序列的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述发夹序列与所述触发序列结合，使结合在靶蛋白上的DNA逻辑门纳米器件顶端形成G4纳米线结构；步骤5：在步骤4的反应体系中进一步加入血红素；步骤6：在步骤5的反应体系中进一步加入多巴胺和H2O2，室温孵育10-120min，形成黑色聚多巴胺纤维，从而对细胞膜表面靶蛋白显色。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 一种DNA逻辑门纳米器件在细胞表面蛋白染色中的应用

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