申请/专利权人：上海碧云天生物技术有限公司

申请日：2023-08-01

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117925547A

主分类号：C12N9/02

分类号：C12N9/02;C12N15/53;C12Q1/66;G01N21/76

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明提供了一系列底物结合口袋经改造的高酶活性、高热稳定性的萤火虫萤光素酶，及其制备方法及应用。本发明人通过对萤火虫萤光素酶底物结合口袋空间结构的分析，考虑了萤火虫萤光素酶涉及酶活性与热稳定性的大量氨基酸位点，设计、构建并检测了一系列萤火虫萤光素酶突变体，所述萤火虫萤光素酶具有高的酶活性以及热稳定性。

主权项：1.一种萤火虫萤光素酶突变体，其特征在于，其空间结构上邻近底物结合口袋，对底物的识别与结合或蛋白空间构象的稳定具有贡献，其氨基酸序列对应于SEQIDNO:2所示氨基酸序列，进行以下突变：A.选自a-t的突变或其组合：a第293位氨基酸F突变为LM1；b第254位氨基酸Y突变为SM2；c第239位由V突变为AM5；d第137位由N突变为K，第235位由A突变为T，第280位由K突变为R，第333位由N突变为D，第422位由I突变为VM13；e第57位由K突变为RM14；f第42位由T突变为A，第282位由E突变为D，第392位由K突变为I，第426位由D突变为VM15；g第525位由S突变为PM17；h第231位氨基酸N突变为A，R或KM20、M21或M22；i第229位氨基酸A突变为R或KM23或M24；j第229位由A突变为K，第231位由N突变为KM25；k第231位由N突变为K，第293位由F突变为LM27；l第229位由A突变为R，第231位由N突变为RM29；m第231位由N突变为R，第293位由F突变为LM30；n第229位由A突变为K，第231位由N突变为AM31；o第231位由N突变为A，第293位由F突变为LM33；p第229位由A突变为K，第231位由N突变为K，第293位由F突变为LM34；q第229位由A突变为R，第231位由N突变为K，第293位由F突变为LM35；r第229位由A突变为K，第231位由N突变为R，第293位由F突变为LM36；s第229位由A突变为R，第231位由N突变为R，第293位由F突变为LM37；t第229位由A突变为K，第231位由N突变为K，第293位由F突变为LM38；B.将A蛋白的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有A蛋白功能的由A衍生的蛋白，但对应于A中a-t所限定的位点是保守的；C.与A蛋白的氨基酸序列有80％以上同源性且具有A蛋白功能的由A衍生的蛋白，但对应于A中a-t所限定的位点是保守的。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海碧云天生物技术有限公司 经改造的萤火虫萤光素酶、其制备方法及应用

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