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申请/专利权人：广州金域医学检验中心有限公司
申请日：2024-01-25
公开（公告）日：2024-04-26
公开（公告）号：CN117929735A
主分类号：G01N33/577
分类号：G01N33/577;G01N33/68
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开
摘要：本发明公开了一种疫苗接种后机体免疫细胞因子表达水平的检测方法，其是在复苏的待测外周血单个核细胞冻存样品静息后，加入特异性肽池培养；在培养过程中加入蛋白转运阻断剂；培养结束后，转移到流式管中；固定细胞并对细胞进行透膜处理后加入单克隆抗体试剂组合避光孵育；流式细胞术检测免疫细胞因子的表达水平。本发明的检测方法可以提高检测准确性和灵敏度，且能大大缩短实验周期，提高实验效率，避免假阳性的结果，克服蛋白转运阻断剂导致的抗原内吞现象，可以准确评估疫苗接种后机体免疫状态。
主权项：1.一种疫苗接种后机体免疫细胞因子表达水平的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1、在复苏的待测外周血单个核细胞冻存样品静息0～1h时，加入特异性肽池，培养5～7h；2、在培养结束前4小时，加入蛋白转运阻断剂；待培养结束后，充分吹打细胞，转移到流式管中；离心弃上清，再加入磷酸盐缓冲液，离心弃上清；3、在流式管中加入免疫细胞表面标志抗体CD3、CD8和CD45，以及FixableViabilityStain700，混匀；3～5℃避光孵育25～35min；加入含新生牛牛血清的磷酸盐缓冲液，轻柔吹吸混匀，离心弃上清，再重复洗涤一遍，离心弃上清；4、加入细胞透膜试剂固定细胞并进行透膜处理后，再平均分成检测管和同型对照管；在检测管和同型对照管中分别加入单克隆抗体试剂组合1和单克隆抗体组合试剂2，3～5℃避光孵育25～35min；所述单克隆抗体组合试剂1包括：FITCIFN-γ、PEIL-5、PerCP-CyTM5.5TNF、APCIL-4、BV421IL-2、BV605CD4；所述单克隆抗体组合试剂2包括：FITCIgG1、PEIgG1、PerCP-CyTM5.5IgG1、APCIgG1、BV421IgG2a、BV605CD4；5、采用流式细胞术检测待测外周血单个核细胞冻存样品的免疫细胞因子的表达水平。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广州金域医学检验中心有限公司 疫苗接种后机体免疫细胞因子表达水平的检测方法
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