申请/专利权人：新乡医学院

申请日：2024-01-24

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117925715A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N5/10;C12N15/12;C12Q1/02;C12R1/91

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明公开了一种基于CRISPRCas9构建Npc1及Npc1Trem2基因敲除细胞系的方法，该细胞系采用以下步骤制备：靶点设计及sgRNA序列合成；载体构建；细胞转染；单克隆筛选；敲除细胞系鉴定后获得Npc1基因敲除成功的单克隆细胞系；在Npc1基因敲除的BV2细胞系基础上，重复上述步骤获得Npc1Trem2双基因敲除成功的单克隆细胞系。本发明建立的Npc1及Npc1Trem2基因敲除的BV2细胞系，将为深入研究C1型尼曼匹克病的疾病机制、基因功能及以Trem2为靶点进行干预等提供更直接有效的细胞研究和干预模型，具有较大的应用研究价值。

主权项：1.基于CRISPRCas9构建Npc1基因敲除细胞系的方法，其特征在于：设计合成靶向Npc1基因的sgRNA序列，将合成的sgRNA序列和Cas9蛋白孵育结合为RNP复合物，采用Neon转染系统进行细胞转染，随后筛选单克隆生长的细胞，经过鉴定后获得敲除Npc1基因的BV2细胞系，其中靶向Npc1基因的sgRNA序列包括sgRNA1和sgRNA2：sgRNA1：TGAGGTCTCGGATCAGAGCGTGG；sgRNA2：AGGGCCGAAGGTTACAACTGTGG。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 新乡医学院 基于CRISPR/Cas9构建Npc1及Npc1/Trem2基因敲除细胞系的方法

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