申请/专利权人：西宝生物科技(上海)股份有限公司;湖北西宝生物医药有限公司

申请日：2024-01-12

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117925657A

主分类号：C12N15/55

分类号：C12N15/55;C12N9/16;C12N15/85

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明提供了一种高活性碱性磷酸酶的生产方法，具体涉及ibAPII基因编码序列的优化方法：以ibAPII的氨基酸序列SEQIDNO:1为初始序列，加入氨基酸序列为SEQIDNO:2的人血清白蛋白的分泌肽，形成能在哺乳动物细胞内分泌表达的高活性ibAPII前体蛋白，其氨基酸序列为SEQIDNO:3；根据SEQIDNO:3逆向翻译出其cDNA序列，根据宿主细胞密码子偏好，通过密码子优化软件优化cDNA序列以适合宿主细胞表达，形成基因编码序列SEQIDNO:4；通过miRNA靶标搜索软件找出SEQIDNO:4中与宿主细胞内miRNA同源的靶标序列，修改该靶标序列，以使在不改变高活性ibAPII前体蛋白活性的前提下，其基因编码序列中不再含有与宿主细胞miRNA靶标序列同源性≥65%的序列，形成能在哺乳动物细胞内高效表达的ibAPII最终基因编码序列SEQIDNO:5。

主权项：1.一种能在哺乳动物细胞内高效表达的碱性磷酸酶ibAPII基因编码序列的优化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，以小牛肠碱性磷酸酶ibAPII的氨基酸序列SEQIDNO:1为初始序列，加入氨基酸序列为SEQIDNO:2的人血清白蛋白的分泌肽，形成能在哺乳动物细胞内分泌表达的高活性ibAPII前体蛋白，其氨基酸序列为SEQIDNO:3；步骤S2，根据所述高活性ibAPII前体蛋白的氨基酸序列逆向翻译出其cDNA序列，根据宿主细胞密码子偏好，通过密码子优化软件优化所述cDNA序列以适合宿主细胞表达，形成基因编码序列SEQIDNO:4；步骤S3，通过miRNA靶标搜索软件找出所述基因编码序列SEQIDNO:4中与宿主细胞内miRNA同源的靶标序列，修改该靶标序列，以使在不改变所述高活性ibAPII前体蛋白活性或氨基酸序列的前提下，其基因编码序列中不再含有宿主细胞miRNA的靶标同源序列，或不再含有与宿主细胞miRNA靶标序列同源性≥65%或≥70%或≥80%的序列，形成能在哺乳动物细胞内高效表达的碱性磷酸酶ibAPII最终基因编码序列，当修改靶标序列以使在不改变所述高活性ibAPII前体蛋白活性的前提下，其基因编码序列中不再含有与宿主细胞miRNA靶标序列同源性≥65%的序列时，形成能在哺乳动物细胞内高效表达的碱性磷酸酶ibAPII最终基因编码序列SEQIDNO:5，其氨基酸序列为SEQIDNO:6。

全文数据：

权利要求：

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