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申请/专利权人：南京元荟生物科技有限公司
申请日：2020-07-31
公开（公告）日：2024-04-26
公开（公告）号：CN111849895B
主分类号：C12N5/0783
分类号：C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.04.26#授权;2020.11.17#实质审查的生效;2020.10.30#公开
摘要：本发明涉及一种腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞的分离方法，所述分离方法包括如下步骤：1无菌收集肿瘤患者腹水，离心收集细胞沉淀；2去除细胞沉淀中的红细胞、成纤维细胞和纤维细胞；3用含有FBS和rIL‑2的完全培养基对细胞进行培养，收集悬浮细胞；4最后用淋巴细胞分离液对悬浮细胞进行分离纯化，得到腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞。本发明所涉及的腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞的分离方法简单易操作，分离得到的肿瘤浸润淋巴细胞增殖能力强，经体外rIL‑2活化扩增后，细胞数量迅速增多；纯度高，几乎达到100％；CD8+T细胞占比高达25.7％，对肿瘤细胞显示出良好的抗瘤活性。
主权项：1.一种腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括如下步骤：1无菌收集肿瘤患者腹水，800-1300rpm离心3-6min，收集细胞沉淀；2去除步骤1细胞沉淀中的红细胞、成纤维细胞和纤维细胞；所述去除红细胞的方法为：将细胞沉淀与红细胞裂解液混合，700-900rpm离心3-8min，收集细胞沉淀；所述去除成纤维细胞和纤维细胞的方法为：将细胞沉淀用含10％的FBS完全培养基重悬后置于培养皿，培养40-45min使细胞贴壁，吸取除贴壁以外的悬浮细胞，重复贴壁方法2-5次，700-900rpm离心2-4min，取细胞沉淀；3用含有FBS和rIL-2的完全培养基对步骤2得到的细胞进行培养，收集悬浮细胞；具体包括如下步骤：S1用含10-15％FBS和500-800IUmLrIL-2的完全培养基培养1-3h；S2收集步骤S1的悬浮细胞，再用含20-25％FBS和100-200IUmLrIL-2的完全培养基培养3-8h；4最后用淋巴细胞分离液对步骤3悬浮细胞进行分离纯化，得到腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京元荟生物科技有限公司 一种腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞的分离方法及其应用
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