申请/专利权人：南京师范大学

申请日：2021-11-22

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN114426963B

主分类号：C12N11/18

分类号：C12N11/18;C12N9/10;C12N9/02;C12N15/11;C12P5/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.05.20#实质审查的生效;2022.05.03#公开

摘要：本发明提出一种利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法，包括：1DNA折纸结构的制备；2DNA锚链与番茄红素合成途径中关键酶的结合；3结合DNA锚链的关键酶与DNA折纸结构的组装。本发明将DNA折纸从常见的双酶催化中的应用拓展到三酶级联催化中，利用DNA折纸可寻址、可编程组装的优点，精确调控级联酶的间距和配比，首次将DNA折纸结构应用于番茄红素的多酶级联反应之中，实现了番茄红素合成中的多酶“底物通道”效应以及“区域化”控制组分的目标，实现了番茄红素的高效合成。

主权项：1.一种利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）DNA折纸结构的制备：将合成DNA折纸所需的DNA短链等量混匀，混合物经过退火自组装形成DNA纳米结构，反应结束后使用超滤管去除未结合的DNA短链，得到纯化的DNA折纸结构；当制备的DNA折纸结构为边长6nm的DNA四面体时所需的DNA短链分别为6-1、6-2、6-3和6-4，序列如Seq.No1至4所示；当制备的DNA折纸结构为边长10nm的DNA四面体时所需的DNA短链分别为10-1、10-2、10-3和10-4，序列如Seq.No5至8所示；当制备的DNA折纸结构为边长13nm的DNA四面体时所需的DNA短链分别为13-1、13-2、13-3、13-4、13-5、13-6、13-7和13-8，序列如Seq.No9至16所示；（2）DNA锚链与番茄红素合成途径中关键酶的结合：番茄红素合成关键酶分别为牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶和八氢番茄红素脱氢酶，将这三个关键酶分别与SPDP以一定比例混合，于黑暗条件下孵育，利用超滤管除去过量的SPDP，随后SPDP修饰的关键酶分别与经过预处理的巯基修饰的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4以一定比例混匀，于黑暗条件下孵育，反应结束后超滤除去过量的锚链DNA，得到结合了DNA锚链的级联酶复合物；与关键酶结合的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4序列如Seq.No17至20所示；（3）结合了DNA锚链的关键酶与DNA折纸结构的组装：结合了DNA链的级联酶复合物与DNA折纸以一定比例混匀，然后在PCR仪中退火组装，结束后用超滤管除去过量的游离酶，得到组装了番茄红素关键酶的DNA折纸结构。

全文数据：

权利要求：

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