申请/专利权人：合肥大学

申请日：2022-10-26

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN116024187B

主分类号：C12N9/04

分类号：C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;C12N15/70;C12P17/06;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2024.04.23#著录事项变更;2023.05.16#实质审查的生效;2023.04.28#公开

摘要：本发明公开了一种维兰特罗中间体的酶催化制备方法，所述维兰特罗中间体为R‑叔丁基2‑2,2‑二甲基‑4H‑苯并[D][1,3]二噁英‑6‑基‑2‑羟乙基，所述方法包括提供了一种酮还原酶Esp的核酸和蛋白序列；以及酶催化步骤如下：将缓冲液、葡萄糖、粗酶液、辅酶因子、底物TM5：N‑2‑2,2‑二甲基‑4H‑1,3‑苯并二噁英‑6‑基‑2‑氧代乙基氨基甲酸叔丁酯按照一定的比例混合，在pH=7.0±0.5、温度为29±1℃下反应，经过后处理得到所述产物。与现有技术相比，本发明不需要额外的设备投入、生产成本低、操作简便、反应条件温和、污染相对化学法低、手性纯度极高且质量稳定、可以迅速工业化等优点，具有非常大的的工业化应用价值。

主权项：1.一种化合物TM6的酶催化制备方法，其特征在于：将缓冲液、葡萄糖、粗酶液、辅酶因子NADP+、底物TM5和葡萄糖脱氢酶GDH按照一定的比例混合，在pH=7.0±0.5、温度为29±1℃下反应，后处理操作得到产物；其中，所述化合物TM6结构如下：；所述底物TM5结构如下：；辅酶因子NADP+的浓度为0.01～10gL；底物TM5浓度为10～100gL；其中所述粗酶液中酶为羰基还原酶Esp，所述羰基还原酶Esp的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；所述粗酶液为根据如下方法制备的羰基还原酶Esp酶液：（a）将羰基还原酶Esp的宿主菌株涂布在含有50μgmL氨苄的LB平板上，37℃过夜培养后，从中挑选阳性菌落接种到50mL液体LB培养基中进行培养；培养4h后，吸取10mL种子液转入1L新鲜的LB液体培养基；（b）当培养的浓度达到OD6000.6-1.0时，加入终浓度为0.05~1.0mmolL的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷进行诱导，诱导温度为16-35℃，诱导培养为8-16h，诱导培养后通过离心或浓缩得到更高浓度的湿菌体，经过超声波破碎或者高压均质机破碎后离心收集上清液，即为羰基还原酶Esp的酶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合肥大学 一种维兰特罗中间体的酶催化制备方法

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