申请/专利权人：广州梵之容化妆品有限公司;广州青囊生物科技有限公司

申请日：2023-02-28

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN116211733B

主分类号：A61K8/65

分类号：A61K8/65;A61K8/64;A61Q19/02;A61Q19/08;A61Q19/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2024.04.12#专利申请权的转移;2023.06.23#实质审查的生效;2023.06.06#公开

摘要：本发明公开了一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法，涉及蛋白肽技术领域。本发明先利用过氧化氢对藜麦麸皮和藜麦秸秆进行预处理，有利于提取液的进入以及藜麦蛋白的溶出，然后采用复合酶对藜麦蛋白、鱼皮胶原蛋白分别进行分级酶解处理，获得小分子多肽，提高多肽得率，进而增强酶解液的美白活性；然后利用对苯二酚对鱼皮胶原蛋白肽进行偶联改性，提高鱼皮胶原蛋白肽的美白效果，并与藜麦多肽复配，协同增效，实现美白活性物质的深层吸收。本发明采用天然物质为原料，安全无毒副作用，同时又能实现美白效果。

主权项：1.一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：（1）将藜麦原料和过氧化氢溶液按料液比1:10~1:18混合，过氧化氢溶液中过氧化氢和去离子水的质量比为4:100~8:100，加入氢氧化钠至溶液pH为7.0，75~85℃下浸泡1.5~2.5h后，6000rpm离心8min，取固体，50℃干燥6h得预处理藜麦；将预处理藜麦和蒸馏水按料液比1:15混合，25kHz超声40~50min后，4000rpm离心10min，取上清液，真空度0.084MPa、50℃、160rpm旋蒸10~16min得混合液，加入混合液体积3~4倍的无水乙醇，静置30min后，5000rpm离心25~35min，取沉淀，得藜麦蛋白；（2）将藜麦蛋白和蒸馏水按料液比1:10混合，搅拌均匀后，加入氢氧化钠至溶液pH为8，加入藜麦蛋白质量0.00075~0.001倍的碱性蛋白酶，50℃酶解2~4h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至50℃，加入盐酸至溶液pH为6.5，加入藜麦蛋白质量0.0005~0.001倍的中性蛋白酶，酶解1~3h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至45℃，加入盐酸至pH为2.8，加入藜麦蛋白质量0.0005~0.001倍的酸性蛋白酶，酶解1~2h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，离心、脱色、过滤，得藜麦多肽酶解液；（3）将鱼皮用刀切成2×2cm的小块，用蒸馏水冲洗3~5次，浸泡于鱼皮质量20~34倍的蒸馏水中，浸泡24h后，取出鱼皮，按料液比1:10浸泡于氯化钠溶液，氯化钠溶液中氯化钠和蒸馏水的质量比为3:100，5℃、100rpm搅拌12h后，取出鱼皮，按料液比1:30浸泡于柠檬酸，溶胀24h，8000rpm均质处理3min后，过滤，盐析至氯化钠浓度为4molL，4℃下静置24h，6000rpm离心15min，取沉淀，得鱼皮蛋白；（4）将鱼皮蛋白和蒸馏水按料液比1:9混合，搅拌均匀后，加入氢氧化钠至溶液pH为8，加入鱼皮蛋白质量0.00075~0.001倍的碱性蛋白酶，50℃酶解2~4h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至50℃，加入盐酸至溶液pH为6.5，加入鱼皮蛋白质量0.0005~0.001倍的中性蛋白酶，酶解1~3h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至45℃，加入盐酸至pH为2.8，加入鱼皮蛋白质量0.0005~0.001倍的酸性蛋白酶，酶解1~2h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，离心、脱色、过滤，得鱼皮胶原蛋白肽酶解液；（5）将无水乙醇、去离子水、氢氧化钠按质量比1:0.6:0.1混合，搅拌溶解后，加热至75℃，加入无水乙醇质量0.2~0.4倍的对苯二酚，80rpm搅拌10~15min后，加入无水乙醇质量0.2~0.3倍的氯化苄，继续反应50~70min后，真空度0.085MPa、55℃蒸馏2~3h后，冷却至室温，加入盐酸至固体完全析出，抽滤，取滤饼，将滤饼置于滤饼质量1~3倍的质量分数为17%的氢氧化钠溶液中，80rpm搅拌20~30min后，抽滤，取滤液，加入盐酸至固体不再析出，抽滤，取滤饼，用蒸馏水洗涤至洗液pH为7，40℃干燥8h得对苄氧基苯酚；将对苄氧基苯酚、鱼皮胶原蛋白肽酶解液、4-二甲氨基吡啶、二氯甲烷按质量比1:2:1.0:30~1:3:1.3:35混合，冷却至0℃，加入对苄氧基苯酚质量1.8~2.0倍的碳二亚胺、对苄氧基苯酚质量30~35倍的二氯甲烷，60rpm搅拌5~10min，升至室温，继续搅拌2~4h后，升温至40℃，加热3~5h后，萃取，用饱和氯化钠溶液洗涤5~7次得混液，加入混液质量0.1倍的无水硫酸镁，干燥8~12h后，过滤，层析，得中间物；（6）将中间物、无水乙醇、钯碳按质量比1:22:0.05~1:27:0.1混合，氢气氛围下，70rpm搅拌6~8h后，过滤，取滤液，真空度0.085MPa、55℃下蒸馏1.5~3h，层析，得鱼皮胶原蛋白肽改性物；将藜麦多肽酶解液、鱼皮胶原蛋白肽改性物按质量比2:1混合，得美白复合蛋白肽酶解液。

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