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申请/专利权人：苏州泓迅生物科技股份有限公司
申请日：2024-02-01
公开（公告）日：2024-04-30
公开（公告）号：CN117947525A
主分类号：C40B50/06
分类号：C40B50/06;C40B40/06;C12N15/113;C12N15/10
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.17#实质审查的生效;2024.04.30#公开
摘要：本发明提供了一种双sgRNA文库的构建方法及其应用，所述方法包括：首先，以带有“gRNAscaffold‑启动子2”元件序列的质粒作为模板、以预先设计并合成的具有多样化展示形式的正、反向引物池作为引物，通过PCR扩增的方法获得带有“sgRNA1‑gRNAscaffold‑启动子2‑sgRNA2”元件序列集合的PCR产物；然后，将PCR产物与线性化目的载体通过重组连接的方法形成带有“启动子1‑sgRNA1‑gRNAscaffold‑启动子2‑sgRNA2‑gRNAscaffold”元件组合的重组质粒集合，获得双sgRNA质粒文库。本发明所提供的双sgRNA文库的构建方法操作简单、成本低；引物池的多样化展示设计形式实现了双sgRNA文库的构建策略的灵活应用，为基因编辑下的高通量筛选研究提供有利工具。
主权项：1.一种双sgRNA文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：a分别合成带有sgRNA序列的正向引物池sgRNA1pool和反向引物池sgRNA2pool；b以带有“gRNAscaffold-启动子2”元件序列的质粒作为模板，以步骤a所述正、反向引物池作为引物进行PCR扩增，获得带有“sgRNA1-gRNAscaffold-启动子2-sgRNA2”元件序列集合的PCR产物；c将步骤b所述PCR产物通过重组连接的方法连接在目的载体的sgRNA启动子1和gRNAscaffold元件之间，获得带有“启动子1-sgRNA1-gRNAscaffold-启动子2-sgRNA2-gRNAscaffold”元件组合的初代双sgRNA重组质粒集合；d将步骤c所述初代双sgRNA重组质粒集合通过电穿孔转化的方式转入电穿孔转化专用的大肠杆菌感受态细胞，然后，将所述大肠杆菌感受态细胞涂布于带有抗生素的固体培养基上，置于30℃培养箱进行过夜培养；次日，将生长出的菌落收集在一起进行质粒抽提，所得质粒集合即为双sgRNA质粒文库双sgRNA文库。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 苏州泓迅生物科技股份有限公司 一种双sgRNA文库的构建方法及其应用
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