申请/专利权人：北京医院

申请日：2024-01-19

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN117604105B

主分类号：C12Q1/6886

分类号：C12Q1/6886;C12Q1/686

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2024.03.15#实质审查的生效;2024.02.27#公开

摘要：本发明涉及融合基因检测溯源技术领域，建立了一种基于内参基因的BCR‑ABL1p190融合基因检测溯源方法，溯源方法包括内参基因ABL1检测方法的溯源；可溯源至参考质粒的p190质粒的制备；p190融合基因检测方法的溯源；建立的溯源方法可以将内参基因ABL1与p190融合基因检测的具体拷贝数以及p190融合基因内参基因ABL1检测的比例都溯源至有证参考质粒，溯源过程中的线性关系曲线良好，R2与斜率都接近1。该溯源方法对于促进p190型融合基因检测的标准化具有重要意义。

主权项：1.一种基于内参基因的BCR-ABL1p190融合基因检测溯源方法，其特征在于，所述检测溯源方法的步骤包括：S1：自建内参基因ABL1检测方法，通过使用自建的内参基因ABL1检测方法对有证p210参考质粒ERM-AD623进行内参基因ABL1检测，建立参考质粒定值浓度与检测浓度的线性关系曲线，获取自建内参基因ABL1检测方法的转换因子CF；其中自建内参基因ABL1检测方法为使用包括终浓度为900nM的引物对、250nM荧光探针和预混液的荧光定量PCR,扩增的内参基因ABL1的引物对序列如序列表中SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，检测内参基因ABL1的荧光探针序列如序列表中SEQIDNO.3所示，其中荧光探针的荧光发生基团为FAM，荧光淬灭基团为BHQ1；S2：制备p190质粒，制备可溯源至参考质粒的p190质粒，其p190融合基因和S1中的内参基因ABL1为1:1，配制酶切反应体系对p190质粒进行单酶切使其线性化，电泳后切下目的条带进行胶回收，使用保护稀释液进行洗脱，使用内参基因ABL1的检测方法对线性化的p190质粒进行检测，根据实际检测结果以及S1建立的线性关系曲线，将p190质粒的定值结果溯源至参考质粒；S3：p190质粒检测，自建p190融合基因检测方法，其中p190融合基因检测方法为使用包括终浓度为900nM的引物对、250nM荧光探针和预混液的荧光定量PCR,扩增的p190融合基因的引物对序列如序列表中SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示，检测p190融合基因的荧光探针序列如序列表中SEQIDNO.7所示，荧光探针的荧光发生基团为FAM，荧光淬灭基团为BHQ；使用自建的内参基因ABL1和p190融合基因检测的方法对梯度稀释的p190质粒进行检测，建立内参基因ABL1和p190融合基因检测结果的线性关系曲线，获取p190融合基因检测方法的CF。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京医院 基于内参基因的BCR-ABL1 p190融合基因检测溯源方法

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