申请/专利权人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院

申请日：2021-07-20

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN114591883B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2022.06.24#实质审查的生效;2022.06.07#公开

摘要：本发明提供了一种主动脉细胞单细胞悬液的制备方法，通过先对主动脉血管组织进行处理，然后进行二次消化反应，以获得单细胞产率高、数量多、细胞活性高及细胞功能强的单细胞悬液，解决了传统主动脉细胞单细胞悬液效率低获得的细胞质量差的技术问题。

主权项：1.一种主动脉细胞单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括：S1、取主动脉血管组织，清洗，然后以第一温度于含8％～20％牛血清的1640培养基中无菌培养，备用；S2、取步骤S1中备用的主动脉血管组织，剥离脂肪和结缔组织，并切碎至1～2mm3的组织碎块，备用；S3、按体积比例为1:5～8的比值分别取步骤S2中备用的组织碎块和现配的组织消化悬浮液，混合后置于37℃的环境中进行第一次消化反应第一时长，至无成形组织碎块，过滤、离心、去除上清液，得第一细胞悬液；S4、按体积比例为1：1.8～3的比值分别取步骤S3中得到的第一细胞悬液和胰酶，混合后置于37℃的环境中进行第二次消化反应第二时长，过滤、离心、去除上清液，得第二细胞悬液；S5、将步骤S4中获得的第二细胞悬液用含10％牛血清的1640培养基重悬，得目的单细胞悬液；所述组织消化悬浮液包括胶原酶I：胶原酶II：透明质酸酶：DNA酶：含10％牛血清的1640培养基的体积配比为25:25:30:1:9，所述胰酶为质量浓度为0.02％的胰酶、所述第一时长为4～5小时；和或，在步骤S4中，所述第二时长为18～35分钟；所述第一温度为0～4℃。

全文数据：

权利要求：

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