申请/专利权人：广东省农业科学院果树研究所

申请日：2023-06-09

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN116590333B

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2023.09.01#实质审查的生效;2023.08.15#公开

摘要：本发明所述番木瓜高效遗传转化体系的建立方法，以番木瓜胚性细胞悬浮系ECS为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，并通过对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行了摸索，最后获得抗性再生植株，成功建立了以番木瓜ECS为转化受体的农杆菌介导的高效遗传转化体系。该体系为番木瓜基因功能研究和分子育种提供了新的途径，也为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状分子改良提供新的技术支撑。

主权项：1.一种番木瓜遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取番木瓜ECS进行增殖培养，得到ECS转化受体，备用；所述增殖培养步骤的培养基为：12MS培养基+1.5-2.5mg·L-12,4-D+350-450mg·L-1谷氨酰胺+50-70g·L-1蔗糖，pH5.5-6.0；（2）取含有目的基因的重组质粒转入农杆菌并进行增殖培养，得到农杆菌浸染液；（3）将所述ECS转化受体与所述农杆菌浸染液进行混合共培养；取在ML液体培养中继代培养10d的ECS，经离心去上清后，加入步骤（2）所述的农杆菌浸染液，在（27±1）℃、黑暗条件下静置1-2h，然后在（27±1）℃、黑暗、50r•min-1振荡条件下共培养2d；所述混合共培养步骤的培养基为：12MS培养基+1.5-2.5mg·L-12,4-D+350-450mg·L-1谷氨酰胺+50-70g·L-1蔗糖，pH5.5-6.0；（4）收集步骤（3）获得的培养物进行筛选培养，筛选得到生长良好的抗性番木瓜ECS；所述筛选培养的方法为：将培养物离心、去除上清后，清洗3次，转移至含有100μmol•L-1AS、200mgL-1头孢霉素和5mgL-1潮霉素的液体筛选培养基LSM中，继续黑暗培养，每14d继代一次；所述筛选培养步骤的培养基为：12MS培养基+1.5-2.5mg·L-12,4-D+350-450mg·L-1谷氨酰胺+50-70g·L-1蔗糖+80-120μmol·L-1乙酰丁香酮+200mg·L-1头孢霉素+5mg·L-1潮霉素，pH5.5-6.0；（5）将所述抗性番木瓜ECS继续进行再生培养，即得。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省农业科学院果树研究所 一种番木瓜遗传转化体系的建立方法

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