申请/专利权人：格勒诺布尔大学;格勒诺布尔大学中心医院;法国国家健康与医学研究院

申请日：2017-10-27

公开（公告）日：2024-05-03

公开（公告）号：CN110225926B

主分类号：C07K16/18

分类号：C07K16/18

优先权：["20161027 FR 1660450"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.03#授权;2022.08.26#专利申请权的转移;2019.10.08#实质审查的生效;2019.09.10#公开

摘要：本发明涉及抗Tau纳米抗体。

主权项：1.一种针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链，所述纳米抗体包含：氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3。

全文数据：抗Tau纳米抗体技术领域本发明涉及抗Tau纳米抗体。背景技术目前有一种共识，认为阿尔茨海默氏病AD的散发形式sporadicform是一种连续体，从临床前无症状形式到临床上以认知和记忆测试为特征的疾病，以及各种生物标志物Dubois等人，LancetNeurology,13,614-6292014。然而，新治疗策略的开发需要诊断方法，其允许早期检测并且使得可以监测处于危险中的群体中的神经变性迹象，以便选择应被治疗的患者并控制治疗的效果。AD由进行性痴呆综合征和两种特征性脑损伤的组合定义：由淀粉样肽Aβ组成的细胞外老年斑AP和由过度磷酸化的Tau蛋白聚集体组成的神经原纤维变性NFD。在皮质中观察到AP之前，NFD出现在内嗅皮层结构中Braak等人，JournalofNeuropathologicalExperimentalNeurology,7011:960-9692011。此外，皮质分布和NFD的数量与AD患者的记忆问题相关Nelson等人，JournalofNeuropathologicalExperimentalNeurology,715；362-3812012。最近，已经表明Tau的寡聚形式代表了Tau蛋白病的传播相关的毒性形式Usenovic等人，JournalofNeuroscience,3542:14234-142502015Goedert等人，CurrentNeurologyandNeuroscience,14:4952014，如AD，通过逐渐污染神经元。核脑成像单光子发射计算机断层扫描SPECT和正电子发射断层扫描PET是确定与AD相关的分子病变的存在和进展的适当工具Dubois等人，Alzheimer’s&Dementia,123:292-3232016。AP的放射性配体已经可用作Catafau和Bullich,ClinicalandTranslationalImaging,31:39-552015一些放射示踪剂。目前正在开发针对NFD内的□-片的示踪剂。它们中的两个，18F-AV-1451Ossenkoppele等人，Brain,1395:1551-15672016和18F-THK5117Jonasson等人，JournalofNuclearMedicine,574:574-5812016，可能有助于患有NFD型病变的患者的分层。另一方面，它们都不能检测和监测Tau的可溶性寡聚形式。在生理条件下，高度可溶的Tau蛋白与微管相互作用以稳定它们，其部分磷酸化允许其与微管交替分离。Tau蛋白通常非常易溶并且是非结构化形式。在某些病理条件下，Tau的翻译后修饰，特别是过度磷酸化，导致蛋白质结构化并形成聚集体：二聚体、寡聚体、纤维：螺旋形细丝对导致NFD的形成。从AD和其他tau蛋白病的病变的毒性和传播的角度来看，目前主要重点属于Tau寡聚体。在申请US20150266947中描述了针对寡聚体形式、特别是二聚体和三聚体形式的Tau蛋白的scFv。这些大小为约30kDa的scFv不针对纤维形式的Tau。为了开发用于靶向该分子的各种聚集形式的核成像的Tau的病理形式的新标记，本发明人通过靶向病理形式，特别是Tau的早期病理形式，开发了纳米抗体Nbs，特别是VHH，更特别是寡聚体形式和可选的纤维形式的Tau。因此，这些纳米抗体能够改善AD的诊断和监测，并且还能够评估潜在治疗的效果。这些纳米抗体还可以靶向并因此鉴定除AD之外的tau蛋白病中Tau的病理形式的存在。根据本发明的VHH形式的纳米抗体是对应于某些骆驼科抗体的重链的可变结构域的抗体的小片段。它们是衍生自具有抗原结合结构域的免疫球蛋白的最小功能元件10-15kDa，并且它们对抗原的亲和力为约1纳摩尔。由于它们结构简单，没有Fc型结构域，分子量低，因此它们是穿越血脑屏障的合适工具Caljon等人，BritishJournalofPharmacology,1657:2341-23532012。发明内容因此，本发明涉及结合Tau蛋白的病理形式的纳米抗体，Tau蛋白的病理形式特别是Tau的早期病理形式，例如寡聚体形式的Tau和可选的纤维形式的Tau。因此，本发明的主题是针对寡聚体形式的Tau蛋白并且针对纤维形式的Tau蛋白的纳米抗体。本发明还涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链。因此，本发明的主题是针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与包含以下氨基酸序列的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。本发明进一步涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白，包含以下各项：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2，iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。本发明还涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体包含以下氨基酸序列：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。本发明进一步涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，包含：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2，iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3；或a或b中定义的纳米抗体的功能保守变体，其包含序列SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5或SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8中分别一个、两个或三个中的一个或两个氨基酸的保守替换。本发明还涉及如上定义的纳米抗体，其用作非侵入性体内医学成像中的造影剂，其用于诊断或预后方法，优选用于tau蛋白病的诊断或预测，或其用作药物。本发明的主题还是该纳米抗体用于体外检测样品中的Tau蛋白的用途，特别是病理形式、优选以早期病理形式、更特别是寡聚体形式和可选地纤维形式的Tau蛋白。最后，本发明涉及包含该纳米抗体结合药学上可接受的载体的药物组合物。具体实施方式Tau蛋白病术语“tau蛋白病”将大约20种病理状况组合在一起，这些病理状况的共同之处在于存在Tau蛋白的脑内沉积，特别是病理形式，并且其具有临床、病理学、生物化学和遗传相似性。术语“Tau蛋白的脑内沉积”是指Tau聚集体的存在，因此病理形式的Tau的存在。某些tau蛋白病，例如进行性核上性麻痹、皮质基底节变性和Gerstmann-Straussler-Scheinker病，其特征在于存在神经原纤维变性NFD，其不能与阿尔茨海默氏病那些区分。在这种情况下，术语“Tau蛋白的脑内沉积”或“Tau的病理形式的存在”表示例如，神经原纤维变性NFD的存在。例如，皮克氏病的特征是被称为皮克氏体的球形神经元内含物。这些皮克氏体由无序直长丝组成，因此也是Tau的病理形式。“神经原纤维变性”也称为神经原纤维缠结表示区域，例如在大脑皮质中，神经元群体在其内部、细胞核周围和细胞延伸中表现出由成对螺旋丝PHF和或直长丝SF组成的纤维缠结。应注意，NFD形成包括Tau的聚集，也称为“原纤维聚集”或“原纤维生成”。在此过程中，Tau蛋白以寡聚体的形式组织，然后以纤维的形式组织，其以螺旋形细丝对的形式组织并以直长丝的形式组织。成对的螺旋长丝形式和直长丝形式构成NFD。术语“Tau的病理形式”包括寡聚体形式、纤维形式、成对的螺旋长丝形式和直长丝形式的Tau蛋白。然而，已发现中间聚集形式，即寡聚体形式的Tau和纤维形式的Tau是有毒的，寡聚体是毒性最大的。它们被术语“Tau的早期病理形式”作为目标，因此特别是指寡聚体形式和纤维形式的Tau，更特别是寡聚体形式的Tau。Tau蛋白是一种细胞内蛋白质；然而，在某些情况下，Tau的病理形式可能是细胞外的。在一个特定的实施方式中，Tau的病理形式，优选寡聚体形式的Tau，是细胞外的。因此，在一个实施方式中，“Tau的病理形式”是指寡聚体形式、纤维形式、成对螺旋长丝形式和或直长丝形式的Tau。优选地，Tau的病理形式是Tau的早期病理形式，更特别是寡聚体形式的Tau和可选的纤维形式的Tau，例如寡聚体形式的Tau或纤维形式的Tau。在一个实施方式中，“tau蛋白病”是指与如上定义的Tau的病理形式的存在相关的疾病。tau蛋白病选自阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹或Steele-Richardson-Olzewski病皮质基底节变性、皮克氏病、尼曼-皮克病病C型、Gerstmann-Straussler-Scheinker病和与17号染色体突变相关的额颞叶变性，优选为阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性和Gerstmann-Straussler-Scheinker病，特别是阿尔茨海默氏病。Tau术语“Tau蛋白”或“Tau”表示Tau小管相关单位蛋白质，其是哺乳动物蛋白质。Tau蛋白是微管缔合蛋白MAP家族的成员。它由位于17号染色体上的位置17q21的MAPT基因编码。Tau蛋白也称为MSTD；PPND；DDPAC；MAPTL；MTBT1；MTBT2；FTDP-17；PPP1R103。在人类中，Tau蛋白基本上在神经元中合成。Tau的初级转录本包含16个外显子。在大脑中，一些外显子不被翻译。外显子2、3和10可选择地剪接并且对成人脑组织特异。这3个外显子的可变剪接产生6种可能的组合2-3-10-至2+3+10+。因此，在蛋白质水平上，成年大脑中存在六种Tau蛋白同种型。应注意，Tau蛋白表达在发育期间受到调节。因此，单个同种型，称为胎儿同种型，在出生时存在，并且不包含由外显子2、3或10编码的插入物。其他同种型在后续发育过程中出现。它们的序列长度范围为352至441个氨基酸。Tau蛋白的氨基末端部分，也称为投射结构域projectiondomain，具有仍然知之甚少的作用。该投射结构域可能与质膜和某些细胞器如线粒体相互作用。至于羧基末端结构域，它包含3个没有外显子10或4个具有外显子10重复区段，特异性结合结构域称为3R或4R，其包含微管蛋白结合结构域的保守基序，其控制微管稳定性。这些R基序构成微管上Tau蛋白的锚定点。没有由外显子1010-编码的序列的三种同种型具有三个微管结合结构域3R，也称为2N3R、1N3R和0N3R，并且由于氨基末端部分而不同。具有由外显子10编码的序列的三种同种型具有四个微管结合结构域4R，称为2N4R、1N4R和0N4R，并且由于氨基末端部分而不同。该第四结构域与微管蛋白二聚体的相互作用更大，这进一步稳定了微管并且可以调节神经突延伸长度以及神经元可塑性。在本发明的一个实施方式中，所述Tau蛋白选自2N4R、1N4R、0N4R、2N3R、1N3R和0N3R同种型。Tau蛋白优选为2N4R同种型。Tau蛋白的2N4R同种型，也称为Tau-F或Tau441或htau40，其氨基酸序列具有441个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-8SEQIDNo.21。Tau蛋白的1N4R同种型，也称为Tau-E或Tau412，其氨基酸序列具有412个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-7SEQIDNo.22。Tau蛋白的0N4R同种型，也称为Tau-D或Tau383，其氨基酸序列具有383个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-6SEQIDNo.23。Tau蛋白的2N3R同种型，也称为Tau-C或Tau410，其氨基酸序列具有410个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-5SEQIDNo.24。Tau蛋白的1N3R同种型，也称为Tau-B或Tau381，其氨基酸序列具有381个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-5SEQIDNo.25。Tau蛋白的0N3R同种型，也称为胚胎-Tau或Tau352，其氨基酸序列具有352个氨基酸，可以在UniprotKb数据库的2016年11月16日版本中找到，登录号P10636-2SEQIDNo.26。Tau蛋白是一种神经元蛋白，通常位于轴突中，更少见于树突中，特别是在细胞体内。在天然形式中，Tau是单体形式的非结构化蛋白质。因此，在本发明的上下文中，术语“天然Tau”意指单体形式的Tau蛋白，反之亦然。天然形式的Tau蛋白的功能是通过特异性结合结构域3R和4R与微管相互作用并促进微管组装和稳定性。Tau蛋白与微管的相互作用主要受磷酸化调节。Tau是一种磷蛋白，含有大约80个潜在的磷酸化位点。Tau蛋白磷酸化状态的调节是蛋白激酶和蛋白磷酸酶的组合活性的结果。通常，Tau蛋白的过度磷酸化，特别是在特异性结合结构域3R和4R中，降低了其对微管的亲和力，这可导致后者的去稳定化，并因此导致细胞骨架的解体。此外，如上文“tau蛋白病”部分所述，这种过度磷酸化可导致Tau的聚集并因此导致NFD的形成。本领域技术人员区分Tau蛋白的异常磷酸化和过度磷酸化。“异常磷酸化”由在生理条件下不经历磷酸化的位点中的磷酸化组成。参考非生理学表位；这些是例如，由AT100和TG-3抗体识别的表位。另一方面，术语“过度磷酸化”意指在生理表位水平上的磷酸化比在正常成人脑中的磷酸化程度更高，或者对于给定位点，高百分比的Tau蛋白被磷酸化时。Tau蛋白的过度磷酸化可导致tau从微管中脱离并增加tau的细胞内浓度，导致形成寡聚体然后形成纤维，直至形成成对的螺旋长丝和直长丝，其缠结将构成纤维变性。结果是在神经元中积累了tau蛋白，并且涉及超过20种不同的神经变性疾病，称为tau蛋白病。Tau蛋白的积累有时甚至是这种tau蛋白病的唯一原因。本领域技术人员已知可以通过使用非磷酸化的Tau蛋白来研究Tau聚集Xu,S等人，Alzheimer’sDement.2010Mar；62:110-7,KumarS.etal.JBiolChem.2014Jul18；28929:20318-32；Flach,K等人，JBiolChem.2012Dec21；28752:43223-33。本发明的发明人开发了针对非磷酸化Tau蛋白、特别是寡聚体形式的本发明的纳米抗体。然而，如免疫组织化学所证明的，本发明的纳米抗体还特异性结合人脑切片中神经原纤维变性中的Tau蛋白，其中Tau蛋白以磷酸化形式存在。因此，在本发明的一个实施方式中，Tau蛋白是非磷酸化的和或磷酸化的。在Tau蛋白的某些脑内沉积中，所述蛋白质也可能被降解并失去N-末端部分，同时保留微管结合结构域。该截短的Tau蛋白包含Tau蛋白的羧基末端部分，因此，取决于起始同种型，是3R区R1、R2、R3、R4或4R区R1、R3和R4。这种蛋白酶解促进纤维的形成，然后成对的螺旋长丝的聚集变得不可溶，并且也是某些tau蛋白病的指标。因此，在一个实施方式中，Tau蛋白是截短的Tau蛋白，其包含Tau蛋白的羧基末端部分，特别是Tau的重复基序的R3或R4区，优选为R3区。优选地，截短的Tau蛋白缺乏N-末端结构域。在一个特定的实施方式中，Tau蛋白包含具有氨基酸序列VQIVYKPVDLSKVTSKCGSEQIDNo.27的肽或由具有氨基酸序列VQIVYKPVDLSKVTSKCGSEQIDNo.27的肽组成，其对应于如上定义的tau441的氨基酸306至323。抗Tau纳米抗体在本发明的上下文中，术语“抗体”和“免疫球蛋白”具有相同的含义并且没有区别地使用。在常规抗体中，两条重链通过二硫键相互连接，每条重链通过二硫键与轻链连接。有两种类型的轻链：λλ和κκ轻链。有五种主要类别的重链或同位素，其决定了抗体的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。每条链包含不同序列的结构域。轻链包含两个结构域：可变结构域VL和恒定结构域CL。重链包含四个结构域：可变结构域VH和三个恒定结构域CH1、CH2和CH3，统称为CH。重链VH和轻链VL的可变区决定结合识别和抗原特异性。轻链CL和重链CH的恒定区的结构域赋予重要的生物学特性，例如抗体链结合、分泌、经胎盘移动性、补体结合和Fc受体结合。Fv片段是免疫球蛋白的Fab片段的N-末端部分，其由轻链和重链的可变部分组成。抗体的特异性在于抗体结合位点和抗原决定簇之间的结构互补性。抗体结合位点由主要来自高变区或互补决定区CDR的残基组成。偶尔，源自非高变区或“框架”FR区域的残基可以影响结构域的整体结构并因此影响结合位点。在本发明的上下文中，术语“CDR”是指氨基酸序列，它们一起限定免疫球蛋白的天然结合位点的天然Fv区的结合亲和力和特异性。免疫球蛋白的重链和轻链各自具有三个CDR，分别表示H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3和L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。因此，抗原结合位点包括6个CDR，其包含重链可变区和轻链可变区的所有CDR。抗体或纳米抗体序列中的CDR的位置可由本领域技术人员使用先前描述的技术确定。通常，可以通过用合适的系统例如，3730XLDNA分析仪和ABIPRISMBigDyeTerminatorcyc对抗体或纳米抗体的DNA进行测序来鉴定CDR，然后通过使用专用数据库例如国际ImMunoGeneTics数据库或IMGT分析由此获得的序列Lefranc2003Dev.Comp.Immunol.27:55或Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterestNationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.,1991，优选为IMGT。在本发明的上下文中，术语“框架区”、“框架”或“FR”是指插入在CDR之间的氨基酸序列。在本发明的上下文中，术语“纳米抗体”、“VHH”、“VHH抗体片段”和“单结构域抗体”无区别地使用，并且表示在骆驼科动物中发现的那些类型的抗体的单个重链的可变结构域，其天生没有轻链。在没有轻链的情况下，纳米抗体各自具有三个CDR，分别表示为CDR1、CDR2和CDR3。根据本发明的纳米抗体尤其可以是骆驼、单峰骆驼、美洲驼或羊驼纳米抗体。优选地，根据本发明的纳米抗体是美洲驼纳米抗体。表述“针对Tau蛋白的纳米抗体”在本文中意指能够选择性结合Tau蛋白的纳米抗体，如“Tau”部分中所定义。优选地，纳米抗体是Tau特异性的，也就是说它与Tau结合而排除任何其他分子。本发明人已经制备了针对Tau蛋白的病理形式的纳米抗体，Tau蛋白的病理形式是例如寡聚体形式和可选的纤维形式的Tau蛋白。纳米抗体也可以针对纤维形式的截短的Tau蛋白。特别地，本发明人用富含寡聚体形式的Tau蛋白的Tau蛋白制剂免疫美洲驼，制备富含纤维形式的Tau蛋白的Tau蛋白的制剂和富含纤维形式的截短的Tau蛋白的截短的Tau蛋白的制剂。随后，发明人更准确地鉴定了两种针对Tau的纳米抗体，并且具有其他抗Tau纳米抗体不具有的意想不到的额外特征。具体地，这两种纳米抗体2C5和S2T2M3_E6，特别是2C5，以寡聚体形式和可选地以纤维形式识别Tau。当其是如上定义的截短的Tau蛋白时，也识别纤维形式的Tau蛋白。同时，这两种纳米抗体2C5和S2T2M3_E6，特别是2C5，不以单体形式与天然Tau蛋白结合。此外，这两种纳米抗体2C5和S2T2M3_E6，特别是2C5，不与淀粉样β肽纤维结合。因此，在一个优选的实施方式中，纳米抗体针对寡聚体形式的Tau蛋白。在本发明的上下文中，术语“寡聚体”涉及通过如本申请实施例中所述的体外原纤化方法获得的Tau制剂。通常，Tau原纤化40μM例如在37℃下在缓冲液中进行，例如MOPS3-N-吗啉代丙磺酸，通常为20mM，通常在pH7下，通常在肝素10μM和NaN34％存在下，最终体积通常为1.5ml。通常，通过在通常48小时后在-80℃下冷冻样品来停止原纤化fibrillation，以获得寡聚体形式的Tau。取决于确切的原纤化时间，该Tau蛋白质制剂富含寡聚体形式的Tau蛋白。术语“富含寡聚体形式的Tau蛋白”是指寡聚体形式的Tau蛋白的制剂，其中超过50％的Tau蛋白是寡聚体形式。例如，大于50％、大于55％、大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％的Tau蛋白以寡聚体形式存在。本领域技术人员已知富含寡聚体形式的Tau蛋白的制剂还含有天然形式的Tau蛋白和纤维形式的Tau蛋白。因此，在一个实施方式中，寡聚体形式的Tau蛋白是单体形式、寡聚体形式和纤维形式的Tau蛋白的混合物，其中超过50％的Tau蛋白是寡聚体形式，特别是大于55％、大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％的Tau蛋白为寡聚体形式。本领域技术人员还已知，可以使用本领域技术人员已知的几种方法，包括例如尺寸排阻色谱法，从这种制剂中纯化寡聚体形式的Tau蛋白。寡聚体优选包含2-45个Tau单元。具有2-8个Tau单元的寡聚体被称为可溶性寡聚体，并且具有多于8个最高达45个Tau单元的寡聚体被称为粒状寡聚体并且可以是可溶的或不可溶的。在一个实施方式中，这些寡聚体可以使用原子力显微镜或电子显微镜表征为具有约12至29nm直径的圆点。在另一个实施方式中，这些寡聚体可以使用尺寸排阻色谱法表征为具有约12至35nm直径的球形分子。因此，在本发明的上下文中，术语“寡聚体”是指具有2至50个Tau单元、特别是2至20个、优选2至12个Tau单元的Tau聚集体或聚合物，例如Tau的二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体、十聚体、十一聚体或十二聚体，或具有20至45，优选30至45个Tau单元，例如35至45，优选为38至42个Tau单元。在某些实施方式中，Tau蛋白是二聚体或三聚体。在某些实施方式中，寡聚体形式的Tau蛋白是可溶的和或不可溶的，更优选是可溶的。在一个实施方式中，本发明的纳米抗体对寡聚体形式的Tau蛋白具有≤20nM的亲和力，例如≤10nM，≤8nM，≤7nM或≤5nM，例如0.1nM至20nM，特别是1nM至10nM，或1nM至7nM，例如5nM的亲和力。术语“亲和力”是指大分子与其结合的抗原之间的结合能力，特别是纳米抗体与其结合的抗原之间的结合能力，例如本发明的纳米抗体和如上所定义的病理形式的Tau蛋白之间的结合能力。本发明的纳米抗体的亲和力和因此能够与例如寡聚体或纤维形式的Tau蛋白结合的能力，可以通过几种方法在体外测量，包括表面等离子体共振SPR，特别是使用BIAcore2000仪器-PharmaciaBiosensor，Uppsala，Sweden或例如通过ELISA测定，如实施例中所述。在一个实施方式中，本发明的纳米抗体还以纤维形式结合Tau蛋白。在本发明的上下文中，术语“纤维”涉及通过如本申请的实施例中所述的原纤化方法获得的Tau蛋白的制备。通常，Tau原纤化40μM例如在37℃下在缓冲液中进行，例如MOPS3-N-吗啉代丙磺酸，通常为20mM，通常在pH7下，通常在肝素10μM和NaN34％存在下，最终体积通常为1.5ml。通常，通过在通常72小时后在-80℃下冷冻样品来停止原纤化，以获得纤维形式的Tau。因此，这种纤维形式的Tau蛋白的制剂是富含纤维形式的Tau蛋白的Tau蛋白的制剂。术语“富含纤维形式的Tau”是指纤维形式的Tau蛋白质的制剂，其中大于50％的Tau蛋白质是纤维形式。例如，大于50％、大于55％、大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％的Tau蛋白以纤维形式存在。本领域技术人员已知富含纤维形式的Tau蛋白的制剂还含有天然形式的Tau蛋白和寡聚体形式的Tau蛋白。因此，在一个实施方式中，纤维形式的Tau蛋白是单体形式、寡聚体形式和纤维形式的Tau蛋白的混合物，其中大于50％的Tau蛋白是纤维形式，特别是大于55％、大于60％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％的Tau蛋白为纤维形式。本领域技术人员还已知，可以使用本领域技术人员已知的几种方法，包括例如尺寸排阻色谱法，从这种制剂中纯化纤维形式的Tau蛋白。在本发明的上下文中，术语“纤维”描述了人工获得的Tau聚合物或聚集体，其模拟体内Tau原纤化并因此模拟构成NFD的成对的螺旋长丝和直长丝。因此，在本发明的上下文中使用的Tau纤维包括成对的螺旋长丝和直长丝。通过电子显微镜可以将这些纤维表征为具有丝状外观。在一个实施方式中，本发明的纳米抗体对纤维形式的Tau蛋白具有≤20nM的亲和力，例如≤10nM，≤8nM，≤7nM或≤6nM，例如0.1nM至20nM，特别是1nM至10nM，或1nM至8nM，例如6nM的亲和力。在另一个实施方式中，本发明的纳米抗体还与截短的Tau蛋白结合。优选地，该截短的蛋白质是纤维形式，并且也可以称为R3肽纤维。截短的Tau蛋白如上文“Tau”部分中所定义。特别地，该截短的Tau蛋白包含氨基酸序列SEQIDNo.27或由氨基酸序列SEQIDNo.27组成。在一个实施方式中，本发明的纳米抗体对纤维形式的截短Tau蛋白具有≤100nM的亲和力，例如≤80nM，≤70nM，≤60nM或≤50nM，例如1nM至100nM，特别是1nM至80nM，或40nM至60nM，例如50nM的亲和力。在一个实施方式中，本发明的纳米抗体对纤维形式的截短的Tau蛋白具有≤100nM的亲和力，例如1nM至100nM的亲和力，特别是1nM至80nM，1nM至20nM的亲和力，例如10至20nM的亲和力。在本发明的上下文中，“纤维形式的截短的Tau蛋白”或“R3肽纤维”涉及通过如本申请的实施例中所述的体外原纤化方法获得的R3肽的制剂。通常，R30.4μM的原纤化例如在37℃下在缓冲液中进行，例如PBS50mM磷酸盐缓冲盐水，通常在pH7，通常在肝素0.4μM和NaN34％存在下进行，最终体积通常为1.5ml。通常，通过在通常72小时后在-80℃下冷冻样品来停止原纤化，以获得纤维形式的截短TauR3。在一个实施例中，纤维形式的截短的Tau蛋白的亲和力例如通过ELISA测量，例如，在磷酸盐缓冲盐水缓冲液NaCl,137mM；KCl,2.7mM；Na2HOP4,10mM；KH2PO4,1.8mM中，其包含，例如，1％BSA，并具有例如7.5的pH。对于本发明的纳米抗体，本发明人还证实了患有阿尔茨海默氏病的患者的海马体、内嗅皮层和颞叶皮层的细胞体的特异性标记。因此，在一个实施方式中，本发明的纳米抗体还与成对的螺旋长丝和或直长丝结合。术语“成对的螺旋长丝”表示以螺旋形配对的长丝，其包含至少10个、至少12个、至少20个，优选至少40个Tau单元，特别是至少50个或至少60个Tau单元。通常，这些长丝可以通过电子显微镜观察，并且具有8至20nm的直径，例如10至20nm的距离，且螺旋间距为约80nm，例如70高达90nm。术语“直长丝”是指不以螺旋形配对并且包含至少10、至少12、至少20，优选至少40个Tau单元，特别是至少50或至少60个Tau单元的长丝。通常，这些长丝可以通过电子显微镜观察并且具有约10纳米的直径，例如8至17nm，特别是9至12nm，例如10nm。构成NFD的成对的螺旋长丝和直长丝不可溶。在另一个实施方式中，本发明的纳米抗体基本上不与聚合的淀粉样β1-42蛋白相互作用。在一个实施方式中，纳米抗体基本上不与单体形式的Tau蛋白相互作用。当寡聚体形式的Tau蛋白的亲和力和单体形式的Tau蛋白或聚合的淀粉样β1-42蛋白的亲和力非常不同时，纳米抗体“基本上不与蛋白质相互作用”，例如聚合的淀粉样1-42蛋白或单体形式的Tau蛋白。在一个实施例中，不能测量单体形式的Tau蛋白的亲和力，因为结合反应太弱。在另一个实施例中，当在相同的实验条件和相同的纳米抗体浓度下，纳米抗体与单体形式的Tau的结合反应小于相同纳米抗体与寡聚体形式的Tau的结合反应的5％时，纳米抗体基本上不与单体形式的Tau蛋白或聚合的淀粉样β1-42蛋白相互作用。在实践中，所用纳米抗体的浓度可以是EC50浓度或达到饱和平台所需的浓度。例如，本发明的纳米抗体对单体形式的Tau蛋白的亲和力1200nM，例如1400nM，1600nM，1800nM，特别是1800nM。例如，本发明的纳米抗体对聚合的淀粉样β1-42蛋白的亲和力5000nM，例如8000nM，9000nM，10000nM，特别是10000nM。已对本发明的纳米抗体进行测序：-2C5纳米抗体具有氨基酸序列QVQLVQSGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSDTLAWFRQAPGKEREFVASISPSGGVTYYEDSVK.GRFTISRDNSKNTVLLQMNSLTPEDTAVYYCNRDPKYGNTRYWGQVTVSSSEQIDNO:9-S2T2M3_E6纳米抗体具有氨基酸序列EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSRYAMGWFRQAPGKEREFVASISRSGGSTRYADAVKGRFTISRDNTNNTVYLLMNNLKPEDTAVYYCTARRRISGTPWHYWGQGTQVTVSSSEQIDNO:10这两种纳米抗体的CDR已经更具体地测序并且如下：2C5CDR1：GRTFSSDTSEQIDNO:3CDR2：ISPSGGVTSEQIDNO:4CDR3：NRDPKYGNTRYSEQIDNO:5S2T2M2_E6CDR1：GRTFSRYASEQIDNO:6CDR2：ISRSGGSTSEQIDNO:7CDR3：TARRRISGTPQWHYSEQIDNO:8。如本领域技术人员所熟知的，CDR1、CDR2和CDR3的组合足以定义抗原结合位点。本领域技术人员还已知，识别相同抗原的两个纳米抗体竞争结合该抗原。因此，本发明的主题涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与包含以下氨基酸序列的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。可以容易地验证候选纳米抗体与包含如上定义的2C5和或S2T2ME_E6纳米抗体的CDR的纳米抗体下文称为“参考”纳米抗体竞争结合Tau蛋白例如以寡聚体形式的能力例如，通过竞争性ELISA，其中抗原即，寡聚体形式的Tau蛋白与固体支持物结合，并且分别添加含有候选纳米抗体和参考纳米抗体的两种溶液，并且纳米抗体将竞争结合至抗原。然后，可以测量与抗原结合的参考纳米抗体的量，并与针对阴性对照例如没有候选纳米抗体的溶液测量它时与抗原结合的参考纳米抗体的量进行比较。在存在候选纳米抗体的情况下结合的参考纳米抗体的量与在阴性对照存在下结合的参考纳米抗体的量相比降低表明候选纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白。理想地，可以标记参考纳米抗体例如，通过荧光，以便于检测结合的参考纳米抗体。可以连续稀释候选和或参考纳米抗体进行重复测量。在本发明的另一个主题中，本发明涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与选自包含以下各项的纳米抗体的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2，iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。本发明的主题涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，包含以下各项的氨基酸序列：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。本发明还涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，包含：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2，和iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3；或a或b中定义的纳米抗体的功能保守变体，其包含序列SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5或SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8中分别一个、两个或三个中的一个或两个氨基酸的保守替换。在一个优选的实施方式中，该Tau蛋白为寡聚体形式并且可选为纤维形式。发明人还测序了2C5和S2T2M2_E6纳米抗体的“框架”FR区域。相应的序列如下：·2C5οFR1区：QVQLVQSGGGLVQAGGSLRLSCAASSEQIDNO:11οFR2区：LAWFRQAPGKEREFVASSEQIDNO:12οFR3区：YYEDSVKGRFTISRDNSKNTVLLQMNSLTPEDTAVYYCSEQIDNO:13οFR4区：WGQGTQVTVSSSEQIDNO:14·S2T2M2_E6οFR1区：EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASSEQIDNO:15οFR2区：MGWFRQAPGKEREFVASSEQIDNO:16οFR3区：RYADAVKGRFTISRDNTNNTVYLLMNNLKPEDTAVYYCSEQIDNO:17οFR4区：WGQGTQVTVSSSEQIDNO:18。在一个具体实施方式中，本发明涉及针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白是病理形式，特别是寡聚体形式，并且所述纳米抗体与选自包含选自氨基酸序列SEQIDNo.9和SEQIDNo.10的氨基酸序列的纳米抗体的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白。在一个具体实施方式中，本发明涉及纳米抗体，其包含以下或由以下组成：本发明人鉴定的纳米抗体之一的如上文所定义的序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4系列。优选地，根据本发明的纳米抗体因此是包含选自由以下各项组成的组的氨基酸序列或由选自由以下各项组成的组的氨基酸序列组成的纳米抗体：氨基酸序列SEQIDNo.9和SEQIDNo.10或分别包括在氨基酸序列SEQIDNo.9或SEQIDNo.10中的一个、两个或三个CDR中的一个或两个氨基酸的保守替换的其功能保守变体。如上定义的功能保守变体还可以在氨基酸序列SEQIDNo.9或SEQIDNo.10的区域中分别包含一个或多个替换，特别是一个或多个保守替换，所述区域不是CDR，例如是“框架”区域，特别是上面定义的“框架”区域。更优选地，根据本发明的纳米抗体是包含以下或由以下组成的纳米抗体：选自由氨基酸序列SEQIDNo.9和SEQIDNo.10组成的组的氨基酸序列。最优选地，根据本发明的纳米抗体是包含氨基酸序列SEQIDNo.9或由氨基酸序列SEQIDNo.9组成的纳米抗体。在本发明的上下文中，表述“功能保守变体”是指其中替换根据本发明的纳米抗体中的给定氨基酸而不损害纳米抗体的整体构象和功能的变体，包括使用具有相似的性质例如，极性、氢键电位、酸度、碱度、疏水性、芳族基团的存在等的另一种替换一种氨基酸。具有相似性质的氨基酸是本领域技术人员熟知的。例如，精氨酸、组氨酸和赖氨酸是亲水-碱性氨基酸并且可以互换。类似地，异亮氨酸疏水性氨基酸可以被亮氨酸、蛋氨酸或缬氨酸替换。这种变化对纳米抗体的表观分子量或等电点几乎没有影响或没有影响。天然氨基酸可被非天然氨基酸替换，例如D构型的氨基酸、或β或γ氨基酸。保守替换的实施例在下表1中给出。表1：保守替换I侧链特性氨基酸非极性GAPILV不带电极性CSTMNQ带电极性DEKR芳香HFWY其他NQDE或者，可以如Lehninger1975,Biochemistry,2ndEdition,WorthPublishers,Inc.NewYork,NY.,p.71-77所述将保守氨基酸分组，如下表2所示。表2：保守替换II根据另一个替代方案，保守替换的实施例在下表3中给出。表3：保守替换III原始残基替换实施例AVLIRKQNNQHKRDECSGNEDHNQKRILVMAFLIVMAFKRQNMLFIFLVIAPGSTTSWYYWFTSVILMFA这些功能上保守的变体保留结合Tau蛋白的能力，特别是寡聚体形式和可选的纤维形式的Tau蛋白。优选地，这些功能上保守的变体与Tau具有结合亲和力，特别是与寡聚体形式的Tau和可选的纤维形式的Tau，其与相应的纳米抗体相比相等或增加。本领域技术人员知道感兴趣的纳米抗体的氨基酸序列，它们能够通过常规多肽生产技术产生根据本发明的纳米抗体，特别是上文定义的2C5和S2T2M2_E6纳米抗体。例如，它们可以使用众所周知的固相合成方法合成Merrifield1962Proc.Soc.Ex.Boil.21:412；Merrifield1963J.Am.Chem.Soc.85:2149；Tam等人，1983J.Am.Chem.Soc.105:优选使用市售的肽合成仪器例如由AppliedBiosystems,FosterCity,California制造的并遵循制造商的说明书。或者，根据本发明的纳米抗体可以通过本领域技术人员熟知的重组DNA技术合成Maniatis等人，1982MolecularCloning:alaboratorymanual,ColdSpringHarborLaboratories,NY,51-54和412-430。例如，它们可以在将编码感兴趣的多肽的DNA序列掺入表达载体后将其作为DNA表达产物获得，并将这些载体导入适当的原核或真核宿主中，这些宿主将表达感兴趣的多肽，然后可以使用本领域技术人员熟知的技术从中分离它们。如本领域技术人员所熟知的，当通过重组DNA技术合成蛋白质时，通常将其合成与促进其纯化的标签连接。这些标签是本领域技术人员公知的，并且包括例如六聚组氨酸6His、谷胱甘肽S-转移酶GST、myc标签或流感病毒血凝素HA。优选地，根据本发明的纳米抗体包含myc和或六聚组氨酸标签。因此，本发明的主题还由纳米抗体组成，所述纳米抗体包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：所述氨基酸序列选自由序列SEQIDNo.9和SEQIDNo.10组成的组，其在其C-末端或N-末端，优选在其C-末端还包含myc和或六个组氨酸残基标签，更优选地myc和六个组氨酸残基标签。如本领域技术人员所熟知的，当蛋白质与促进其纯化的标签连接时，这种蛋白质在天然序列和该标签之间包含允许蛋白质和该标签之间的酶促切割的序列。因此，包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成的纳米抗体也是本发明的一部分：所述氨基酸序列选自由序列SEQIDNo.19和SEQIDNo.20组成的组。本发明的另一主题涉及包含编码根据本发明的纳米抗体的核酸序列的核酸。在一个特定的实施方式中，根据本发明的核酸包含以下核酸序列或由以下核酸序列组成：所述核酸序列编码由氨基酸序列SEQIDNo.9或SEQIDNo.10之一限定的纳米抗体。优选地，根据本发明的核酸包含编码由氨基酸序列SEQIDNo.9定义的纳米抗体的核酸序列或由编码由氨基酸序列SEQIDNo.9定义的纳米抗体的核酸序列组成。通常，所述核酸是DNA或RNA分子，其可以包含在任何合适的载体中，例如质粒、粘粒、附加体、人工染色体、噬菌体或病毒载体。术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”是指可以将DNA或RNA序列引入宿主细胞的载体，其方式是转化宿主并促进引入的序列的表达例如，转录和翻译。因此，本发明的另一个主题涉及包含根据本发明的核酸的载体。这种载体可包含调节元件，例如启动子、激活子、终止子等，用于引起或指导多肽的表达。用于动物细胞的表达载体的启动子和激活子的实施例包括SV40早期启动子和激活子Mizukami等人，1987J.Biochem.101:1307-1310，莫洛尼小鼠白血病病毒LTR启动子和激活子、免疫球蛋白链启动子Mason等人，1985Cell41:479-487和激活子Gillies等人，1983Cell33:717-728等。可以使用任何动物细胞的表达载体。合适载体的实施例包括pAGE107Miyaji等人，1990Cytotechnology3:133-140、pAGE103Miaukami等人，1987J.Biochem.101:1307-1310、pHSG274Brady等人，1984Gene27:223-232、pKCRO’Hare等人，1981Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:1527-1531、pSG1βd2-4Miyaji等人，1990Cytotechnology3:133-140等。质粒的其他实施例包括复制包含复制起点的质粒，或整合质粒，诸如例如pUC、pcDNA、pBR等。病毒载体的其他实施例包括腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和AAV载体。此类重组病毒可通过本领域技术人员熟知的技术生产，例如通过包装细胞的转染或通过辅助质粒或病毒的瞬时转染。病毒包装细胞的典型实施例包括PA317细胞、PsiCRIP细胞、GPenv+细胞、293细胞等。用于产生这种复制缺陷型重组病毒的详细方案可以在例如，申请WO9514785、WO9622378、US5882887、US6013516、US4861719、US5278056和WO9419478中获悉。本发明的另一个主题涉及用根据本发明的核酸和或载体转染、转导或转化的细胞。术语“转化”是指将“外来的”即，外在的或细胞外的基因或DNA或RNA序列引入宿主细胞中，以便宿主细胞表达所引入的基因或序列以产生感兴趣的物质，通常是由基因或引入的序列编码的蛋白质。接收并表达引入的DNA或RNA的宿主细胞已经“转化”。根据本发明的核酸可用于在合适的表达系统中产生根据本发明的纳米抗体。术语“表达系统”是指在适当条件下相容的宿主细胞和载体，例如，用于表达由载体携带的外源DNA编码的蛋白质并导入宿主细胞中。常规表达系统包括大肠杆菌宿主细胞和质粒载体、昆虫宿主细胞和杆状病毒载体，以及哺乳动物宿主细胞及其载体。宿主细胞的其他实施例包括原核细胞例如，细菌和真核细胞例如，酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞等。具体实施例包括大肠杆菌、克鲁维酵母菌属或酵母属酵母，哺乳动物细胞系例如，Vero细胞、CHO细胞、3T3细胞、COS细胞等以及原代或已建立的哺乳动物细胞培养物例如，由淋巴母细胞、纤维母细胞、上皮细胞、神经细胞、脂肪细胞等产生。实施例还包括小鼠SP20-Ag14细胞ATCCCRL1581、小鼠P3X63-Ag8.653ATCCCRL1580，其中二氢叶酸还原酶基因有缺陷的CHO细胞、大鼠YB23HL.P2.G11.16Ag.20细胞ATCCCRL1662。本发明还涉及用于生产表达根据本发明的纳米抗体的重组宿主细胞的方法，所述方法包括以下步骤：i将如上所述的核酸体外或离体导入感受态宿主细胞中，ii在体外或离体培养获得的重组宿主细胞，和iii可选地选择表达和或分泌所述纳米抗体的细胞。此类重组宿主细胞可用于产生根据本发明的纳米抗体。根据本发明的纳米抗体可以通过本领域技术人员已知的任何技术生产，诸如例如任何化学、生物学、遗传学或酶学技术，单独或组合地。特别地，本发明还涉及制备根据本发明的纳米抗体的方法，所述方法包括以下步骤：i在适于允许表达所述纳米抗体的条件下培养根据本发明的转导或转染或转化的细胞，和ii回收表达的纳米抗体。根据本发明的纳米抗体可以通过常规的免疫球蛋白纯化方法从培养基中适当地分离，诸如例如蛋白A-琼脂糖凝胶、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、亲和透析或色谱法。标记的纳米抗体根据本发明的纳米抗体特别适用于医学成像。在这种情况下，使纳米抗体与可检测标记物连接是特别有利的。本发明人已经表明，当2C5和S2T2M3_E6，特别是2C5纳米抗体在与可检测标记物连接时，它们保留了它们的性质。因此，本发明还涉及与可检测标记物结合的如上定义的纳米抗体。术语“与可检测标记物结合的纳米抗体”在本文中意指可检测标记物直接或间接结合至纳米抗体，例如通过可切割或不可切割的接头肽，或掺入纳米抗体中。可检测标记物尤其可以通过替换例如通过用酪氨酸残基水平的I替换H，通过复合或通过螯合与纳米抗体结合。术语“可检测标记物”在本文中意指产生可检测信号的化合物。当它连接到示踪剂时，它可以监视体内示踪剂变成什么。可检测标记物可以是MRI造影剂、闪烁扫描造影剂、X射线成像造影剂、超声造影剂、光学成像造影剂。可检测标记物的实施例包括放射性元素，荧光团如荧光素、Alexa或花青；化学发光化合物，如鲁米诺；生物发光化合物，如荧光素酶或碱性磷酸酶；和造影剂，如纳米颗粒或钆。合适的可检测标记物的选择取决于所用的检测系统，在本领域技术人员的能力范围内。例如，当检测系统是MRI时，可检测标记物优选是氧化铁纳米颗粒或钆；当检测系统是荧光成像时，可检测标记物优选为荧光素，Alexa或花青；当检测系统为化学发光成像时，可检测标记优选为鲁米诺；当检测系统是生物发光成像时，可检测标记物优选为荧光素酶或碱性磷酸酶；当检测系统是核成像时，可检测标记物优选是放射性元素，例如用于PET成像的镓68Ga，或用于SPECT成像的锝99m99mTc。优选地，可检测标记物是放射性元素。更具体地用于核成像技术的放射性元素的实施例包括锝99m99mTc、碘123123I、碘125125I、氟1818F、镓6868Ga和可以用在人类身上的任何其他放射性元素。因此，优选地，放射性元素选自99mTc、123I、125I、18F和68Ga。最优选地，放射性元素是99mTc或68Ga，更优选为99mTc。用作造影剂发明人已经证明，2C5纳米抗体允许患有阿尔茨海默氏病和纯tau蛋白病的患者的海马体、内嗅皮质和颞叶皮质的细胞体的特异性标记。因此，本发明人证明了本发明的纳米抗体，特别是2C5，构成了对Tau蛋白的病理形式特异的示踪剂，特别是对于Tau的早期病理形式，例如寡聚体形式和可选的纤维形式的Tau，并允许通过成像进行检测。因此，本发明提供如上定义的纳米抗体，其用作医学成像中的造影剂，特别是非侵入性的体内医学成像。还涉及如上定义的纳米抗体用于制备造影剂的用途，所述造影剂用于医学成像，特别是非侵入性体内医学成像。术语“造影剂”在本文中是指物质或组合物，当给予身体时，其使得可以可检测地标记器官或结构组织、细胞、受体，其在没有造影剂的情况下几乎不可见或在医学成像中是不可见的。通过扩展，表述“造影剂”用于表示与如上定义的标记物连接的示踪剂。在本发明的上下文中，“成像方法”是指使得可以使身体内部或身体器官可视化的方法。成像方法的实施例包括侵入性技术，例如血管内超声，和非侵入性技术，例如磁共振成像、X射线成像、超声、光学成像，或核医学，例如闪烁扫描，特别是单光子发射计算机断层扫描SPECT和正电子发射断层扫描PET。优选地，根据本发明的成像方法是闪烁扫描术，特别是SPECT或PET闪烁扫描术。闪烁扫描术基于造影剂通常是静脉内的施用，所述造影剂也称为放射性药物，由标记有放射性元素的示踪剂组成。然后，通过检测发射的γ或β射线确定该造影剂在体内的特定定位。单光子发射计算机断层扫描和正电子发射断层扫描是基于闪烁扫描的断层扫描核医学成像技术，其可以通过一组围绕患者旋转的相机产生三维图像和器官及其新陈代谢的重建。本发明还涉及医学成像方法，特别是非侵入性体内医学成像方法，其中将如上定义的纳米抗体施用给患者。根据本发明的医学成像方法还可以包括以下步骤：检测纳米抗体在患者身体区域中的结合或不存在结合，以及可视化其中检测纳米抗体结合的患者身体区域的步骤。在本发明的上下文中，“患者”表示人或非人哺乳动物，例如啮齿动物大鼠、小鼠、兔、灵长类动物黑猩猩、猫科动物猫或犬狗。优选地，个体是人类。在一个特定的实施方式中，术语“患者”表示呈现与tau蛋白病相关的症状的人类。取决于tau蛋白病，这些症状可以是例如帕金森综合征、轴性肌张力障碍、异手现象或患者的认知问题。可以使用本领域技术人员已知的任何施用方法将根据本发明的纳米抗体施用于患者。特别地，纳米抗体可以例如口服、通过吸入或肠胃外施用特别是通过静脉内注射。当选择肠胃外途径时，纳米抗体可以是可注射溶液和悬浮液的形式，包装在小瓶或瓶中。肠胃外施用形式通常通过将根据本发明的纳米抗体与缓冲剂、稳定剂、防腐剂、增溶剂、等渗剂和悬浮剂混合而获得。根据已知技术，这些混合物可以静脉内注射的形式进行灭菌和包装。本领域技术人员可以例如使用基于磷酸盐的缓冲液作为缓冲剂。悬浮剂的实施例包括甲基纤维素、阿拉伯树胶和羧甲基纤维素钠。稳定剂的实施例包括亚硫酸钠和偏亚硫酸钠，防腐剂的实施例包括对羟基苯甲酸钠、山梨酸、甲酚和氯甲酚。自然施用的纳米抗体的量取决于施用途径，患者的身高和或体重，以及所使用的检测技术。在本发明的上下文中，术语“身体区域”是指生物体的给定区域。它可以是例如，器官、器官或组织的一部分，例如脑，特别是海马、内嗅皮质或颞叶皮层。在一个具体实施方式中，根据本发明的纳米抗体用作医学成像中的造影剂，用于使患者中的病理形式的Tau蛋白可视化，特别是用于使选自寡聚体、纤维、成对螺旋长丝和直长丝，优选地，寡聚体和纤维，甚至更优选地寡聚体的形式的Tau可视化。在一个实施方式中，根据本发明的纳米抗体用作医学成像中的造影剂，用于可视化患者中的神经原纤维变性NFD。在一个实施例中，皮质分布和例如NFD的数量与患有例如AD的患者中的记忆问题相关。诊断用途如上定义的Tau蛋白的病理形式的出现是tau蛋白病的标志物。此外，检测Tau的病理形式，特别是早期病理形式，例如寡聚体和可选的纤维形式的Tau蛋白，使得有可能鉴定参与tau蛋白病之一的传播或发展的毒性形式的存在。因此，病理形式的鉴定，特别是早期病理形式的鉴定，例如寡聚体和可选的纤维形式的Tau，构成了tau蛋白病的表征和或tau蛋白病开始的鉴定。此外，通过成像监测先前鉴定的Tau病理形式的演变即，进展或消退的可能性代表了评估治疗性治疗在被诊断出患有tau蛋白病的患者中的功效的模式。因此，本发明还涉及如上定义的纳米抗体，其用于诊断或预后的方法中。术语“诊断方法”或“诊断”在本文中意指可以确定个体是否患有病理状况的方法。术语“预后方法”或“预后”在本文中意指一种方法，该方法使得可以确定个体是否有发展病理状况的风险。优选地，如上定义的纳米抗体用于诊断或预测tau蛋白病。Tau蛋白病如上所定义。优选地，根据本发明的纳米抗体用于阿尔茨海默氏病的诊断或预后。例如，寡聚体形式的Tau的存在使受试者暴露于发生tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的风险。因此，根据本发明的纳米抗体可用于检测患者中发生tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的风险。术语“发生风险”在本文中旨在表示个体发展病理状况的概率。本发明还涉及用于诊断tau蛋白病和或用于检测患者中发生tau蛋白病的风险的方法，所述方法包括以下步骤：将如上定义的纳米抗体施用给所述患者并且检测所述患者体内的所述纳米抗体，检测所述纳米抗体在脑中的偏好定位是指示tau蛋白病和或发生tau蛋白病的风险。在一个实施方式中，所述方法还包括以下步骤：向所述患者施用淀粉样斑块标记物和检测所述患者体内的所述淀粉样蛋白斑块标记物，检测所述纳米抗体和所述淀粉样蛋白斑块标记物在脑中的偏好定位，指示tau蛋白病和或发生tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的风险。因此，本发明还涉及用于诊断tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的方法，和或用于检测患者中发生tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的风险的方法，所述方法包括的步骤为：i将根据本发明的纳米抗体施用给所述患者并在所述患者体内检测所述纳米抗体，和ii向所述患者施用淀粉样斑块标记物并检测所述患者体内的所述淀粉样蛋白斑块标记物，所述纳米抗体和所述淀粉样斑块标记物在脑中的偏好定位的检测指示了tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病，和或发生tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的风险。在一个实施方式中，这些用于诊断tau蛋白病的方法是体内方法。术语“淀粉样斑块标记物”旨在表示与特异性结合淀粉样斑块的可检测标记物结合的示踪剂，并且其可用作非侵入性，体内成像中的造影剂。淀粉样斑块标记物是例如，18F示踪剂，例如18F-氟尿嘧啶、18F-forbetaben、18F-forbetaben、18F-flutemetanol和18F-AZD4694-marque。在现有技术中描述了取决于特定tau蛋白病，受到Tau病理形式存在影响的脑区域，因此是本领域技术人员已知的。对于几种tau蛋白病，例如在Catafau、AM和Bullich,SClinTranslImaging.2015；31:39-55.Epub2015Jan21或在Tranchant,C.médicinesciencesA1997；13:989-97中描述了神经原纤维变性或Tau的其他病理形式和可能的淀粉样斑块在脑中的定位。术语“偏好定位”旨在表示在脑中检测到的纳米抗体的量，特别是例如海马体、额叶皮层、内嗅皮层和颞叶皮层的细胞体中的纳米抗体的量大于对应于纳米抗体在体内的非特异性位置的背景噪声。例如，进行性核上性麻痹的特征在于脑干和额叶皮层中存在NFD。在另一个实施例中，皮质基底节变性的特征在于顶叶皮层中存在NFD。在另一个实施例中，阿尔茨海默氏病的特征在于内嗅皮质结构中存在NFD。本发明还涉及根据本发明的纳米抗体，其用于治疗性监测已诊断出tau蛋白病的受试者中的tau蛋白病。本发明还涉及根据本发明的纳米抗体用于产生造影剂的用途，所述造影剂用于治疗性监测已诊断出tau蛋白病的受试者的tau蛋白病。术语“治疗性监测”在本文中意指观察受试者对施用于所述受试者的治疗的反应。治疗的治疗效果通常与疾病进展的减缓或抑制，或疾病或与该疾病相关的一种或多种症状的逆转有关。相反，缺乏治疗效果可导致疾病进展或其一种或多种症状的稳定性或甚至加速。例如，如果由于存在Tau的病理形式而诊断出tau蛋白病，则可以通过观察Tau的病理形式的消失、消退、维持或生长来进行治疗监测。因此，根据本发明的用途可包括以下步骤：a将如上定义的纳米抗体施用给检测到病理形式的Tau的受试者；b检测纳米抗体对所述病理形式的Tau的结合；c在对所述受试者施用治疗之前和之后重复步骤a和b；纳米抗体在所述病理形式的Tau上的结合的缺失或减少表明具有治疗效果的治疗。“Tau的病理形式”如上文“tau蛋白病”部分中所定义。优选地，治疗是对tau蛋白病的治疗，并且包括例如使用Tau聚集抑制剂。在另一个实施例中，tau蛋白病的治疗包括使用本发明的纳米抗体。用作药物最近，已经表明Tau的病理形式，例如细胞外毒性形式，代表TauUsenovic等人，2015的毒性形式，其通过逐渐污染神经元参与诸如AD的tau蛋白病在大脑中的传播Goedert等人，2014。因此，靶向毒性形式的Tau以抑制其聚集并因此抑制形成成对的螺旋长丝PHF和直长丝SF是一种用于tau蛋白病、特别是阿尔茨海默氏病的有希望的治疗。因此，本发明还涉及如上定义的纳米抗体在制备药物，特别是用于治疗tau蛋白病的药物中的用途。包括向有此需要的患者施用治疗有效量的如上定义的纳米抗体的治疗方法也是本发明的一部分。因此，使用抗Tau纳米抗体可以抑制Tau聚集的进展。术语tau蛋白病的“治疗”旨在表示对tau蛋白病的“治疗性治疗”或治愈性治疗，其包括减缓或抑制tau蛋白病的进展。它还旨在表示对tau蛋白病的“预防性治疗”，其特别包括预防NFD形成。术语“预防”旨在表示预防或延迟与tau蛋白病相关的临床或生化表现的强度的发生或降低。本领域技术人员凭借其一般知识知道如何确定与给定的tau蛋白病相关的临床或生化表现，并且其能够改善治疗或者预防、延迟或降低强度预防。在tau蛋白病的情况下，感兴趣的生物学参数可以是病理形式的Tau的存在和定位，特别是早期病理形式的Tau，例如寡聚体形式的Tau蛋白和可选的纤维形式的Tau。本发明更具体地涉及如上定义的纳米抗体，其用于治疗tau蛋白病和或预防tau蛋白病，优选用于治疗和或预防阿尔茨海默氏病。本发明还涉及如上定义的纳米抗体用于制备药物的用途，所述药物旨在用于治疗tau蛋白病和或预防可能出现tau蛋白病的患者中的tau蛋白病。本发明还涉及治疗tau蛋白病和或预防有此需要的患者中的tau蛋白病的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的如上定义的纳米抗体。优选地，根据本发明的纳米抗体用于治疗Tau的病理形式，特别是早期病理形式，例如Tau的寡聚体形式，并且最终是Tau的纤维形式。根据本发明的纳米抗体可以例如口服，通过吸入，肠胃外特别是通过静脉内注射以合适的形式施用。当设想肠胃外途径时，纳米抗体可以是包装在小瓶或瓶中的可注射溶质和悬浮液的形式。通常，通过将纳米抗体与缓冲剂、稳定剂、防腐剂、增溶剂、等渗剂和悬浮剂混合来获得肠胃外施用的形式。根据已知技术，随后将这些混合物灭菌，然后以静脉内注射剂的形式包装。通过缓冲剂，本领域技术人员可以使用基于有机磷酸盐的缓冲剂。悬浮剂的实施例包括甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、阿拉伯树胶和羧甲基纤维素钠。此外，根据本发明使用的稳定剂是亚硫酸钠和偏亚硫酸氢钠，而可以提及对羟基苯甲酸钠、山梨酸、甲酚和氯甲酚作为防腐剂。天然施用的纳米抗体的量取决于施用方法、患者的身高和或体重，以及可与其组合的细胞毒性剂的性质。本发明还涉及药物组合物，其包含如上定义的纳米抗体与药学上可接受的载体的组合。术语“药学上”或“药学上可接受的”是指分子实体和组合物，当它们施用于哺乳动物，特别是人时，不产生副反应、过敏反应或否则麻烦的反应。在本发明的上下文中，表述“药学上可接受的载体”包括任何溶剂、分散介质、包衣、抗细菌或抗真菌剂、等渗剂或吸收延迟剂等。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域技术人员公知的。除了常规介质或试剂与活性成分不相容的情况之外，可以设想其在药物组合物中的用途。另外的活性成分也可以掺入组合物中。用于体外检测Tau本发明还涉及如上定义的纳米抗体在体外检测样品中的寡聚体形式的Tau蛋白的用途。术语“样品”在本文中意指较大元件的一部分。优选地，样品是生物来源的物质。生物样品的实施例包括但不限于，器官或组织的部分，例如脑，特别是海马、内嗅皮质或颞叶皮质、血液，特别是脑血液、脑脊髓液。优选地，本发明上下文中的样品是指脑样品。通过下面的附图、序列和实施例更详细地说明本发明。序列简要说明SEQIDNO.1显示了本发明的纳米抗体的共有CDR1氨基酸序列，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y，并且X3是T或A。SEQIDNO.2显示了本发明的纳米抗体的共有CDR2氨基酸序列，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V。SEQIDNO.3显示了2C5纳米抗体的CDR1氨基酸序列。SEQIDNO.4显示了2C5纳米抗体的CDR2氨基酸序列。SEQIDNO.5显示了2C5纳米抗体的CDR3氨基酸序列。SEQIDNO.6显示了S2T2M3_E6纳米抗体的CDR1氨基酸序列。SEQIDNO.7显示了S2T2M3_E6纳米抗体的CDR2氨基酸序列。SEQIDNO.8显示了S2T2M3_E6纳米抗体的CDR3氨基酸序列。SEQIDNO.9显示了2C5纳米抗体的可变区的氨基酸序列。SEQIDNO.10显示了S2T2M3_E6纳米抗体的可变区的氨基酸序列。SEQIDNO.11显示了2C5纳米抗体的FR1区的氨基酸序列。SEQIDNO.12显示了2C5纳米抗体的FR2区的氨基酸序列。SEQIDNO.13显示了2C5纳米抗体的FR3区的氨基酸序列。SEQIDNO.14显示了2C5纳米抗体的FR4区的氨基酸序列。SEQIDNO.15显示了S2T2M2_E6纳米抗体的FR1区的氨基酸序列。SEQIDNO.16显示了S2T2M2_E6纳米抗体的FR2区的氨基酸序列。SEQIDNO.17显示了S2T2M2_E6纳米抗体的FR3区的氨基酸序列。SEQIDNO.18显示了S2T2M2_E6纳米抗体的FR4区的氨基酸序列。SEQIDNO.19显示了具有myc和六个组氨酸残基标签的2C5纳米抗体的可变区的氨基酸序列。SEQIDNO.20显示了具有myc和六个组氨酸残基标签的S2T2M3_E6纳米抗体的可变区的氨基酸序列。SEQIDNO.21显示了具有441个氨基酸的Tau蛋白，也称为Tau-F的2N4R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.22显示了具有412个氨基酸的Tau蛋白，也称为Tau-E的1N4R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.23显示了具有383个氨基酸的Tau蛋白，也称为Tau-D的0N4R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.24显示了具有410个氨基酸的Tau蛋白，也称为Tau-C的2N3R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.25显示了具有381个氨基酸的Tau蛋白，也称为Tau-B的1N3R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.26显示了具有352个氨基酸的Tau蛋白，也称为胚胎-Tau的0N3R同种型的氨基酸序列。SEQIDNO.27显示了截短的Tau蛋白的氨基酸序列，其由Tau蛋白的3R区组成。附图说明图1：显示了ELISA测定的结果的图表，因此显示了2C5纳米抗体对Tau-OTau寡聚体、Tau-FTau纤维、模拟物聚合Tau的R3区和Tau-N天然tau的亲和力的曲线。图2：显示对聚合的Aβ1-42淀粉样肽缺乏亲和力的图表。图3：Ad病例的颞叶皮层切片上的比较免疫组织化学；AAT8是：针对在Ser202和Thr205处磷酸化的PHF的单克隆抗体；B2C5是针对寡聚体形式的Tau的本发明的纳米抗体；CT22是针对tau寡聚体的单克隆抗体；DAb4G8是针对淀粉样β肽聚集形式的单克隆抗体。图4：本发明的纳米抗体的可变序列的比对。图5：显示了ELISA测定的结果的图表，因此显示了2C5纳米抗体没有放射性标记对Tau蛋白的R3序列的聚合物的亲和力的曲线。图6：显示了ELISA测定的结果的图表，因此显示了2C5纳米抗体用碘125放射性标记对Tau蛋白的R3序列的聚合物的亲和力的曲线。实施例1.纳米抗体产生：1骆驼科动物免疫所需的抗原的制备：将编码最长的Tau同种型441aa-45.8kDa的cDNAhtau40克隆到质粒pRK172中、T7RNA聚合酶启动子下游。用重组质粒转化大肠杆菌BL21细菌获自Goedert,M等人，Neuron,34:519-52619895195261989由Baulieu教授的研究组，INSERM,Paris提供的细菌。通过两步FPLC快速蛋白质液相色谱纯化蛋白质：1使用SO4--装载的阳离子交换柱HiTrapSP-XL,Thermoscientific，然后2使用排阻色谱HiTrapSepharoseHP柱-AmershamBiosciences。为了获得富含各种聚合形式的tau寡聚体和纤维的制剂，其模拟体内Tau原纤化，使用Haase等人JournalofNeurochemistry,886:1509-1520,2004的方法，其由Flach等人，JournalofBiologicalChemistry,2012,28752:43223-43233修改。在37℃下在20mM的MOPS3-N-吗啉代丙磺酸缓冲液pH7中，在肝素10μM和NaN34％存在下进行Tau40μM的原纤化，最终体积为1.5mL[21][14]。如上所述分析原纤化。在48小时和72小时后通过在-80℃下冷冻样品来停止原纤化。聚合过程的持续时间适合于a寡聚体和b纤维的生产。平行地，合成覆盖Tau重复基序的R3区的肽并以类似方式聚合。特别地，R30.4μM的原纤化在37℃下在50mM的PBS磷酸盐缓冲盐水缓冲液，pH7中，在肝素0.4μM和NaN34％存在下进行，最终体积为1.5ml。通过在通常72小时后在-80℃下冷冻样品来停止原纤化，以获得纤维形式的截短TauR3。2美洲驼免疫：在相同条件下，用由Tau寡聚体和纤维以及R3聚合物a、b、c组成的混合物免疫美洲驼。在第0、9、18天进行三次连续注射。在第28天和第42天采集血样。将血袋在Ficoll梯度上离心以分离和隔离淋巴细胞，并提取总RNA。3纳米抗体的生产和筛选：它们包括几个步骤：-美洲驼淋巴细胞mRNA的扩增和产生。-表达先前免疫的单峰骆驼的纳米抗体的噬菌体文库的产生。-通过ELISA测定和通过FACS选择表达抗tau寡聚体纳米抗体的噬菌体。-对所选克隆进行测序并鉴定不同的克隆。-确定Nb的序列。-构建和产生编码Nb的mRNA片段，所述Nb包含C-末端Myc和组氨酸标签。-插入细菌和大量生产Nb。2.纳米抗体的体外表征：通过两个步骤表征纳米抗体的亲和力及其特异性：aELISA测定I：具有起始抗原，即富含tau寡聚体的制剂，富含tau纤维的制剂，聚合的R3，以及天然tau蛋白和淀粉样β肽纤维由市售肽制备。测定这些免疫原中每一种的纳米抗体的亲和力常数。b免疫组织化学：源自人类解剖病理学的组织的石蜡切片与日内瓦精神卫生和精神病学系合作。这些切片涵盖了各种或多或少严重的tau蛋白病病例。c将组织切片脱石蜡，然后在PBS-0.2％Triton缓冲液中透化后用浮动切片处理，并通过商业化的去掩蔽溶液Vector-3300暴露抗原。一抗Nb以各种浓度≥20nM在4℃下施用过夜。漂洗后，在环境温度下施用兔抗组氨酸抗体1小时，然后在漂洗后最后施用山羊抗兔第三抗体1小时。在抗生物素蛋白-生物素复合物载体ABC试剂盒和二氨基联苯胺载体ABC试剂盒存在下，通过两个孵化步骤进行可视化。在不存在第一抗体Nb的情况下系统地制备对照切片。将切片安装在载玻片上并用苏木精复染。dELISA测定II：用碘125对2C5纳米抗体进行放射性标记。通过ELISA，在磷酸盐缓冲盐水缓冲液NaCl，137mM；KCl，2.7mM；Na2HPO4,10mM；KH2PO4，1.8mM，1％BSA；pH值＝7.5中进行Tau蛋白的R3序列的聚合物的亲和力测定。在放射性标记之前图5和之后图6进行ELISA。应注意，在放射性标记后，配体保持对其靶标的良好亲和力图6。3.结果：产生了具有单个可变结构域Nbs的几种骆驼科抗体，其特异性针对低分子量15kDa的Tau蛋白寡聚体和纤维的早期病理形式：2C5VHH、S2T2M3_E6VHH。对2C5Nb进行测序并表征为VHH并在体外表征。对于寡聚体、纤维和聚合截短形式的Tau，它表现出5nM、6nM和50nM的相应亲和力Kd。该Nb既不结合天然Tau蛋白Kd1800nM也不结合淀粉样β肽纤维Kd10000nM。图1和图2。通过免疫组织化学对来自解剖病理学不同等级的阿尔茨海默氏症和tau蛋白病的人脑切片测试该Nb。它展示了患有阿尔茨海默氏病的患者以及一例患有纯tau蛋白病的痴呆症的海马体、内嗅皮层和颞叶皮层细胞体的特异性标记表4，图3。成功地进行了这种SdAbs的锝99m放射性标记。选择S2T2M3_E6Nb是因为它对低分子量tau聚合物的亲和力。表4：人体解剖病理学病例测试2C5序列表阿尔卑斯格勒诺布尔大学（UNIVGRENOBLEALPE）格勒诺布尔大学中心医院（CHUGRENOBLE）法国国家健康与医学研究院（INSERMTRANSFERT）抗TAU纳米抗体BET17P4067FR16604502016-10-2727PatentIn版本3.518PRT人工序列（ArtificialSequence）CDR1共有序列MISC_FEATURE6..6Xaa是S或RMISC_FEATURE7..7Xaa是D或YMISC_FEATURE8..8Xaa是T或A1GlyArgThrPheSerXaaXaaXaa1528PRT人工序列（ArtificialSequence）CDR2共有序列MISC_FEATURE3..3Xaa是P或RMISC_FEATURE7..7Xaa是S或V2IleSerXaaSerGlyGlyXaaThr1538PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的CDR13GlyArgThrPheSerSerAspThr1548PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的CDR24IleSerProSerGlyGlyValThr15511PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的CDR35AsnArgAspProLysTyrGlyAsnThrArgTyr151068PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M3_E6的CDR16GlyArgThrPheSerArgTyrAla1578PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M3_E6的CDR27IleSerArgSerGlyGlySerThr15814PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M3_E6的CDR38ThrAlaArgArgArgIleSerGlyThrProGlnTrpHisTyr15109118PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的可变区9GlnValGlnLeuValGlnSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyArgThrPheSerSerAsp202530ThrLeuAlaTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheVal354045AlaSerIleSerProSerGlyGlyValThrTyrTyrGluAspSerVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrValLeu65707580LeuGlnMetAsnSerLeuThrProGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095AsnArgAspProLysTyrGlyAsnThrArgTyrTrpGlyGlnGlyThr100105110GlnValThrValSerSer11510121PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M3_E6的可变区10GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyArgThrPheSerArgTyr202530AlaMetGlyTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheVal354045AlaSerIleSerArgSerGlyGlySerThrArgTyrAlaAspAlaVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnThrAsnAsnThrValTyr65707580LeuLeuMetAsnAsnLeuLysProGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrAlaArgArgArgIleSerGlyThrProGlnTrpHisTyrTrpGly100105110GlnGlyThrGlnValThrValSerSer1151201125PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的FR1区.11GlnValGlnLeuValGlnSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSer20251217PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的FR2区12LeuAlaTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheValAla151015Ser1338PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的FR3区13TyrTyrGluAspSerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsn151015SerLysAsnThrValLeuLeuGlnMetAsnSerLeuThrProGluAsp202530ThrAlaValTyrTyrCys351411PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体2C5的FR4区14TrpGlyGlnGlyThrGlnValThrValSerSer15101525PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M2_E6的FR1区15GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSer20251617PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M2_E6的FR2区16MetGlyTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheValAla151015Ser1738PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M2_E6的FR3区17ArgTyrAlaAspAlaValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsn151015ThrAsnAsnThrValTyrLeuLeuMetAsnAsnLeuLysProGluAsp202530ThrAlaValTyrTyrCys351811PRT人工序列（ArtificialSequence）纳米抗体S2T2M2_E6的FR4区18TrpGlyGlnGlyThrGlnValThrValSerSer151019143PRT人工序列（ArtificialSequence）具有标签Myc和His的纳米抗体2C5的可变区19GlnValGlnLeuValGlnSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyArgThrPheSerSerAsp202530ThrLeuAlaTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheVal354045AlaSerIleSerProSerGlyGlyValThrTyrTyrGluAspSerVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrValLeu65707580LeuGlnMetAsnSerLeuThrProGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095AsnArgAspProLysTyrGlyAsnThrArgTyrTrpGlyGlnGlyThr100105110GlnValThrValSerSerAlaAlaAlaGluGlnLysLeuIleSerGlu115120125GluAspLeuAsnGlyAlaAlaHisHisHisHisHisHisGlySer13013514020146PRT人工序列（ArtificialSequence）具有标签Myc和His的纳米抗体S2T2M3_E6的可变区20GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnAlaGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyArgThrPheSerArgTyr202530AlaMetGlyTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGluArgGluPheVal354045AlaSerIleSerArgSerGlyGlySerThrArgTyrAlaAspAlaVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnThrAsnAsnThrValTyr65707580LeuLeuMetAsnAsnLeuLysProGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrAlaArgArgArgIleSerGlyThrProGlnTrpHisTyrTrpGly100105110GlnGlyThrGlnValThrValSerSerAlaAlaAlaGluGlnLysLeu115120125IleSerGluGluAspLeuAsnGlyAlaAlaHisHisHisHisHisHis130135140GlySer14521441PRT智人（Homosapiens）21MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysGluSerProLeu354045GlnThrProThrGluAspGlySerGluGluProGlySerGluThrSer505560AspAlaLysSerThrProThrAlaGluAspValThrAlaProLeuVal65707580AspGluGlyAlaProGlyLysGlnAlaAlaAlaGlnProHisThrGlu859095IleProGluGlyThrThrAlaGluGluAlaGlyIleGlyAspThrPro100105110SerLeuGluAspGluAlaAlaGlyHisValThrGlnAlaArgMetVal115120125SerLysSerLysAspGlyThrGlySerAspAspLysLysAlaLysGly130135140AlaAspGlyLysThrLysIleAlaThrProArgGlyAlaAlaProPro145150155160GlyGlnLysGlyGlnAlaAsnAlaThrArgIleProAlaLysThrPro165170175ProAlaProLysThrProProSerSerGlyGluProProLysSerGly180185190AspArgSerGlyTyrSerSerProGlySerProGlyThrProGlySer195200205ArgSerArgThrProSerLeuProThrProProThrArgGluProLys210215220LysValAlaValValArgThrProProLysSerProSerSerAlaLys225230235240SerArgLeuGlnThrAlaProValProMetProAspLeuLysAsnVal245250255LysSerLysIleGlySerThrGluAsnLeuLysHisGlnProGlyGly260265270GlyLysValGlnIleIleAsnLysLysLeuAspLeuSerAsnValGln275280285SerLysCysGlySerLysAspAsnIleLysHisValProGlyGlyGly290295300SerValGlnIleValTyrLysProValAspLeuSerLysValThrSer305310315320LysCysGlySerLeuGlyAsnIleHisHisLysProGlyGlyGlyGln325330335ValGluValLysSerGluLysLeuAspPheLysAspArgValGlnSer340345350LysIleGlySerLeuAspAsnIleThrHisValProGlyGlyGlyAsn355360365LysLysIleGluThrHisLysLeuThrPheArgGluAsnAlaLysAla370375380LysThrAspHisGlyAlaGluIleValTyrLysSerProValValSer385390395400GlyAspThrSerProArgHisLeuSerAsnValSerSerThrGlySer405410415IleAspMetValAspSerProGlnLeuAlaThrLeuAlaAspGluVal420425430SerAlaSerLeuAlaLysGlnGlyLeu43544022412PRT智人（Homosapiens）22MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysGluSerProLeu354045GlnThrProThrGluAspGlySerGluGluProGlySerGluThrSer505560AspAlaLysSerThrProThrAlaGluAlaGluGluAlaGlyIleGly65707580AspThrProSerLeuGluAspGluAlaAlaGlyHisValThrGlnAla859095ArgMetValSerLysSerLysAspGlyThrGlySerAspAspLysLys100105110AlaLysGlyAlaAspGlyLysThrLysIleAlaThrProArgGlyAla115120125AlaProProGlyGlnLysGlyGlnAlaAsnAlaThrArgIleProAla130135140LysThrProProAlaProLysThrProProSerSerGlyGluProPro145150155160LysSerGlyAspArgSerGlyTyrSerSerProGlySerProGlyThr165170175ProGlySerArgSerArgThrProSerLeuProThrProProThrArg180185190GluProLysLysValAlaValValArgThrProProLysSerProSer195200205SerAlaLysSerArgLeuGlnThrAlaProValProMetProAspLeu210215220LysAsnValLysSerLysIleGlySerThrGluAsnLeuLysHisGln225230235240ProGlyGlyGlyLysValGlnIleIleAsnLysLysLeuAspLeuSer245250255AsnValGlnSerLysCysGlySerLysAspAsnIleLysHisValPro260265270GlyGlyGlySerValGlnIleValTyrLysProValAspLeuSerLys275280285ValThrSerLysCysGlySerLeuGlyAsnIleHisHisLysProGly290295300GlyGlyGlnValGluValLysSerGluLysLeuAspPheLysAspArg305310315320ValGlnSerLysIleGlySerLeuAspAsnIleThrHisValProGly325330335GlyGlyAsnLysLysIleGluThrHisLysLeuThrPheArgGluAsn340345350AlaLysAlaLysThrAspHisGlyAlaGluIleValTyrLysSerPro355360365ValValSerGlyAspThrSerProArgHisLeuSerAsnValSerSer370375380ThrGlySerIleAspMetValAspSerProGlnLeuAlaThrLeuAla385390395400AspGluValSerAlaSerLeuAlaLysGlnGlyLeu40541023383PRT智人（Homosapiens）23MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysAlaGluGluAla354045GlyIleGlyAspThrProSerLeuGluAspGluAlaAlaGlyHisVal505560ThrGlnAlaArgMetValSerLysSerLysAspGlyThrGlySerAsp65707580AspLysLysAlaLysGlyAlaAspGlyLysThrLysIleAlaThrPro859095ArgGlyAlaAlaProProGlyGlnLysGlyGlnAlaAsnAlaThrArg100105110IleProAlaLysThrProProAlaProLysThrProProSerSerGly115120125GluProProLysSerGlyAspArgSerGlyTyrSerSerProGlySer130135140ProGlyThrProGlySerArgSerArgThrProSerLeuProThrPro145150155160ProThrArgGluProLysLysValAlaValValArgThrProProLys165170175SerProSerSerAlaLysSerArgLeuGlnThrAlaProValProMet180185190ProAspLeuLysAsnValLysSerLysIleGlySerThrGluAsnLeu195200205LysHisGlnProGlyGlyGlyLysValGlnIleIleAsnLysLysLeu210215220AspLeuSerAsnValGlnSerLysCysGlySerLysAspAsnIleLys225230235240HisValProGlyGlyGlySerValGlnIleValTyrLysProValAsp245250255LeuSerLysValThrSerLysCysGlySerLeuGlyAsnIleHisHis260265270LysProGlyGlyGlyGlnValGluValLysSerGluLysLeuAspPhe275280285LysAspArgValGlnSerLysIleGlySerLeuAspAsnIleThrHis290295300ValProGlyGlyGlyAsnLysLysIleGluThrHisLysLeuThrPhe305310315320ArgGluAsnAlaLysAlaLysThrAspHisGlyAlaGluIleValTyr325330335LysSerProValValSerGlyAspThrSerProArgHisLeuSerAsn340345350ValSerSerThrGlySerIleAspMetValAspSerProGlnLeuAla355360365ThrLeuAlaAspGluValSerAlaSerLeuAlaLysGlnGlyLeu37037538024410PRT智人（Homosapiens）24MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysGluSerProLeu354045GlnThrProThrGluAspGlySerGluGluProGlySerGluThrSer505560AspAlaLysSerThrProThrAlaGluAspValThrAlaProLeuVal65707580AspGluGlyAlaProGlyLysGlnAlaAlaAlaGlnProHisThrGlu859095IleProGluGlyThrThrAlaGluGluAlaGlyIleGlyAspThrPro100105110SerLeuGluAspGluAlaAlaGlyHisValThrGlnAlaArgMetVal115120125SerLysSerLysAspGlyThrGlySerAspAspLysLysAlaLysGly130135140AlaAspGlyLysThrLysIleAlaThrProArgGlyAlaAlaProPro145150155160GlyGlnLysGlyGlnAlaAsnAlaThrArgIleProAlaLysThrPro165170175ProAlaProLysThrProProSerSerGlyGluProProLysSerGly180185190AspArgSerGlyTyrSerSerProGlySerProGlyThrProGlySer195200205ArgSerArgThrProSerLeuProThrProProThrArgGluProLys210215220LysValAlaValValArgThrProProLysSerProSerSerAlaLys225230235240SerArgLeuGlnThrAlaProValProMetProAspLeuLysAsnVal245250255LysSerLysIleGlySerThrGluAsnLeuLysHisGlnProGlyGly260265270GlyLysValGlnIleValTyrLysProValAspLeuSerLysValThr275280285SerLysCysGlySerLeuGlyAsnIleHisHisLysProGlyGlyGly290295300GlnValGluValLysSerGluLysLeuAspPheLysAspArgValGln305310315320SerLysIleGlySerLeuAspAsnIleThrHisValProGlyGlyGly325330335AsnLysLysIleGluThrHisLysLeuThrPheArgGluAsnAlaLys340345350AlaLysThrAspHisGlyAlaGluIleValTyrLysSerProValVal355360365SerGlyAspThrSerProArgHisLeuSerAsnValSerSerThrGly370375380SerIleAspMetValAspSerProGlnLeuAlaThrLeuAlaAspGlu385390395400ValSerAlaSerLeuAlaLysGlnGlyLeu40541025381PRT智人（Homosapiens）25MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysGluSerProLeu354045GlnThrProThrGluAspGlySerGluGluProGlySerGluThrSer505560AspAlaLysSerThrProThrAlaGluAlaGluGluAlaGlyIleGly65707580AspThrProSerLeuGluAspGluAlaAlaGlyHisValThrGlnAla859095ArgMetValSerLysSerLysAspGlyThrGlySerAspAspLysLys100105110AlaLysGlyAlaAspGlyLysThrLysIleAlaThrProArgGlyAla115120125AlaProProGlyGlnLysGlyGlnAlaAsnAlaThrArgIleProAla130135140LysThrProProAlaProLysThrProProSerSerGlyGluProPro145150155160LysSerGlyAspArgSerGlyTyrSerSerProGlySerProGlyThr165170175ProGlySerArgSerArgThrProSerLeuProThrProProThrArg180185190GluProLysLysValAlaValValArgThrProProLysSerProSer195200205SerAlaLysSerArgLeuGlnThrAlaProValProMetProAspLeu210215220LysAsnValLysSerLysIleGlySerThrGluAsnLeuLysHisGln225230235240ProGlyGlyGlyLysValGlnIleValTyrLysProValAspLeuSer245250255LysValThrSerLysCysGlySerLeuGlyAsnIleHisHisLysPro260265270GlyGlyGlyGlnValGluValLysSerGluLysLeuAspPheLysAsp275280285ArgValGlnSerLysIleGlySerLeuAspAsnIleThrHisValPro290295300GlyGlyGlyAsnLysLysIleGluThrHisLysLeuThrPheArgGlu305310315320AsnAlaLysAlaLysThrAspHisGlyAlaGluIleValTyrLysSer325330335ProValValSerGlyAspThrSerProArgHisLeuSerAsnValSer340345350SerThrGlySerIleAspMetValAspSerProGlnLeuAlaThrLeu355360365AlaAspGluValSerAlaSerLeuAlaLysGlnGlyLeu37037538026352PRT智人（Homosapiens）26MetAlaGluProArgGlnGluPheGluValMetGluAspHisAlaGly151015ThrTyrGlyLeuGlyAspArgLysAspGlnGlyGlyTyrThrMetHis202530GlnAspGlnGluGlyAspThrAspAlaGlyLeuLysAlaGluGluAl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权利要求：1.一种针对Tau蛋白的纳米抗体，所述Tau蛋白为寡聚体形式且所述纳米抗体缺乏轻链。2.如权利要求1所述的纳米抗体，所述纳米抗体与包含以下氨基酸序列的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。3.如权利要求1或2所述的纳米抗体，所述纳米抗体与选自包含以下的纳米抗体的纳米抗体竞争结合寡聚体形式的Tau蛋白：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2和iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。4.如权利要求1至3中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体包含以下氨基酸序列：iGRTFSX1X2X3SEQIDNo.1作为CDR1，其中氨基酸X1是S或R，X2是D或Y并且X3是T或A，iiISX1SGGX2TSEQIDNo.2作为CDR2，其中氨基酸X1是P或R，并且X2是S或V，和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5或TARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3。5.如权利要求1至4中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体包含：a氨基酸序列iGRTFSSDTSEQIDNo.3作为CDR1，iiISPSGGVTSEQIDNo.4作为CDR2和iiiNRDPKYGNTRYSEQIDNo.5作为CDR3；或b氨基酸序列iGRTFSRYASEQIDNo.6作为CDR1，iiISRSGGSTSEQIDNo.7作为CDR2，和iiiTARRRISGTPQWHYSEQIDNo.8作为CDR3；或a或b中定义的纳米抗体的功能保守变体，其包含序列SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5或SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8中分别一个、两个或三个中的一个或两个氨基酸的保守替换。6.如权利要求1至5中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体包含选自由氨基酸序列SEQIDNo.9或SEQIDNo.10组成的组的氨基酸序列，优选SEQIDNo.9。7.如权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体，所述纳米抗体与可检测标记物结合。8.如权利要求7所述的纳米抗体，所述可检测标记物是放射性元素。9.如权利要求1至8中任一项所述的纳米抗体，其用作非侵入性体内医学成像中的造影剂。10.如权利要求1至9中任一项所述的纳米抗体，其用于诊断或预后的方法，优选用于tau蛋白病的诊断或预后。11.如权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体，其用作药物。12.如权利要求1至6中任一项所定义的纳米抗体用于体外检测样品中的寡聚体形式的Tau蛋白的用途。13.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所定义的纳米抗体与药学上可接受的载体的组合。14.一种核酸，包含编码如权利要求1至6中任一项所定义的纳米抗体的核酸序列。15.一种载体，包含权利要求14所述的核酸。16.一种用权利要求14所述的核酸或权利要求15所述的载体转染的、转导的或转化的细胞。17.一种用于生产表达如权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体的重组宿主细胞的方法，所述方法包括以下步骤：i将权利要求14所述的核酸或权利要求15所述的载体体外或离体导入到感受态宿主细胞中，ii在体外或离体培养获得的重组宿主细胞，和iii可选地选择表达和或分泌所述纳米抗体的细胞。18.一种用于生产权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体的方法，所述方法包括以下步骤：i在适于允许表达所述纳米抗体的条件下培养如权利要求16所述的转导的或转染的或转化的细胞，和ii回收表达的所述纳米抗体。

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