申请/专利权人：深圳市龙华区中心医院

申请日：2021-08-20

公开（公告）日：2024-05-07

公开（公告）号：CN113684247B

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C40B50/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.07#授权;2021.12.10#实质审查的生效;2021.11.23#公开

摘要：本发明涉及一种环状小非编码RNA的测序文库构建方法和应用，构建方法包括以下步骤：1细胞培养；2提取细胞中的总RNA；3使用小RNA提取试剂盒提取RNA，去除28S和18SrRNA；4通过RAP方法进一步去除5S和5.8SrRNA；5去除线性RNA；6构建环状小非编码RNA的测序文库。构建出的环状小非编码RNA的测序文库，rRNA残留少，环状RNA检出效率高，测序通量高，数据重复性较好，测序结果验证成功率高。整个方法操作简便，耗财耗时少且稳定性高，可重复性和可靠性都非常好。

主权项：1.一种环状小非编码RNA的测序文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1细胞培养；2提取细胞中的总RNA；3使用小RNA提取试剂盒提取RNA，去除28S和18SrRNA；4通过RAP方法进一步去除5S和5.8SrRNA；5去除线性RNA；6构建环状小非编码RNA的测序文库；所述步骤4中，将sncRNA与生物素标记的5S、5.8SDNA探针混合，70℃变性5min，冰浴1-2min，然后置于37℃的分子杂交炉中杂交10-15min，使sncRNA中的5S、5.8SrRNA通过碱基配对与5S、5.8SDNA探针充分结合，再加入链霉亲和素磁珠37℃继续杂交15-20min，借助磁力架收集上清，再用脱氧核糖核酸酶处理，降解残余的DNA探针，即得到去除5S、5.8SrRNA的sncRNA溶液；5S、5.8SDNA探针的序列如下：5S-F，GTCTACGGCCATACCACCCTGAA；5S-R，AAGCCTACAGCACCCGGTATTCC；5.8S-F，TAGCGGTGGATCACTCGGCTC；5.8S-R，CGACGCTCAGACAGGCGTAGC；所述步骤5中，采用RNaseR消化法去除线性RNA，所述RNaseR消化法的RNaseR与RNA的用量比为2-4U:1ug，消化条件为37℃下消化30-35min。

全文数据：

权利要求：

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