申请/专利权人：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心)

申请日：2024-03-25

公开（公告）日：2024-05-10

公开（公告）号：CN118006683A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.28#实质审查的生效;2024.05.10#公开

摘要：本发明属于遗传转化技术领域，具体涉及一种根癌农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化方法，包括以下步骤：利用包含目标基因的农杆菌侵染萌发后的大豆种子的子叶节外植体，将侵染后的子叶节外植体接种到无菌培养容器中进行共培养；去掉共培养后外植体的顶芽和侧芽，将下胚轴切除部分，伤口面朝上斜插入SI‑I培养基中进行恢复培养；将恢复培养后的外植体接种到SI‑II培养基上进行芽诱导；切去芽诱导后外植体的子叶部分，在基部作水平方向切口，切口朝下接种至SE培养基中进行芽伸长培养；当伸长芽伸长至3～4cm时，移栽至蛭石中培养，得到遗传转化阳性苗；利用本发明所述遗传转化方法缩短了大豆遗传转化时间，并且提高了遗传转化率。

主权项：1.一种根癌农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：利用包含目标基因的农杆菌侵染萌发后的大豆种子的子叶节外植体，将侵染后的子叶节外植体接种到无菌培养容器中进行共培养；所述共培养的温度为27～29℃；去掉共培养后外植体的顶芽和侧芽，将下胚轴切除部分，伤口面朝上斜插入SI-I培养基中进行恢复培养；将恢复培养后的外植体接种到SI-II培养基上进行芽诱导；切去芽诱导后外植体的子叶部分，在基部作水平方向切口，切口朝下接种至SE培养基中进行芽伸长培养；当伸长芽伸长至3～4cm时，移栽至蛭石中培养，得到遗传转化阳性苗；所述SI-I培养基包括以下组分：B5培养基3.1gL，2-N-吗琳代乙烷磺酸0.59gL，B5Vitamin1000×1mLL，蔗糖30gL，琼脂7.5gL，6-苄氨基腺嘌呤0.5mgL，特美汀200mgL，头孢噻肟钠150mgL和激动素0.2mgL；所述SI-II培养基包括以下组分：B5培养基3.1gL，2-N-吗琳代乙烷磺酸0.59gL，B5Vitamin1000×1mLL，蔗糖30gL，琼脂7.5gL，特美汀200mgL，草铵膦8mgL，6-苄氨基腺嘌呤1.67mgL和头孢噻肟钠150mgL；所述SE培养基包括以下组分：MS培养基4.33gL，2-N-吗琳代乙烷磺酸0.6gL，蔗糖30gL，B5Vitamin1000×1mLL，琼脂7.5gL，吲哚乙酸0.1mgL，头孢噻肟钠150mgL，赤霉素0.5mgL，草铵膦6mgL，特美汀200mgL，反玉米素核苷1mgL和天冬氨酸50mgL。

全文数据：

权利要求：

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