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申请/专利权人：杭州联川生物技术股份有限公司
申请日：2024-03-19
公开（公告）日：2024-05-10
公开（公告）号：CN118006732A
主分类号：C12Q1/6806
分类号：C12Q1/6806;C40B50/06;C40B80/00
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.28#实质审查的生效;2024.05.10#公开
摘要：本发明公开了一种cfDNA甲基化NGS文库的构建方法：重亚硫酸盐处理后的cfDNA单链，利用末端转移酶以NTP为底物，在单链3’端加上2‑4个ATP尾；以T4RNA连接酶在单链3’端连接单链接头；以二链合成引物，利用taqDNA聚合酶进行二链合成，在合成末端多加一个A碱基；利用DNA连接酶，以TA克隆的方式连接双链接头；利用建库index引物进行PCR扩增构建文库。该方法先转化后建库，避免l传统先建库后转化DNA断裂后造成大量数据丢失的问题，同时采用单链和双链两种接头连接方式，规避了普通单链建库需要采用随机引物合成的步骤，既避免了随机引物不可从头合成的问题，又避免了随机引物合成的偏好性。
主权项：1.一种cfDNA甲基化NGS文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1重亚硫酸盐处理后的cfDNA单链，利用末端转移酶以NTP作为底物，在单链3’端加上2-4个ATP尾；2以T4RNA连接酶在单链3’端进行单链接头连接；3以二链合成引物，利用taqDNA聚合酶进行二链合成，并在合成末端多加一个A碱基；4利用DNA连接酶，以TA克隆的方式进行双链接头的连接；5利用建库index引物进行PCR扩增构建文库。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州联川生物技术股份有限公司 一种用于构建cfDNA甲基化NGS文库的试剂盒和方法
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