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申请/专利权人：华南农业大学

摘要：本发明涉及植物激素技术领域，具体涉及一种用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪UPLC‑QQQ‑MSMS同时检测荔枝中多种含量低的赤霉素的方法。该方法建立了适用于荔枝组织赤霉素提取的前处理方法。确定了UPLC‑QQQ‑MSMS检测赤霉素的色谱和质谱条件，最终确定了同时测定荔枝组织赤霉素的检测分析方法。该检测方法前处理操作简单，方法能够准确地同时检测出荔枝中多种含量低的赤霉素，具有可控性强、灵敏度高和检测速度快的优点。

主权项：1.一种用UPLC-QQQ-MSMS同时检测荔枝中多种含量低的赤霉素的方法，其特征在于，包括以下步骤，步骤一、前处理，其包括：S11、将荔枝组织从-100℃～-80℃冰箱取出并置于液氮中，采用冷冻研磨机将荔枝组织磨至粉末状，得到荔枝组织样品；S12、称取至少300mg荔枝组织样品，质量标记为W，向所述荔枝组织样品中加入预冷萃取剂，同时向荔枝组织样品加入赤霉素内标溶液，使赤霉素内标终浓度为15ngmL～25ngmL，得到第一混合液，随后将所述第一混合液充分混匀，其中，每1mg荔枝组织样品中加入0.01mL的萃取剂，所述萃取剂由异丙醇、水和盐酸组成，异丙醇：水：盐酸的体积之比为2：0.5～1：0.0005～0.002，所述盐酸的浓度为0.05％～0.07％；S13、将所述第一混合液置于3℃～5℃下震动遮光浸提1.5～3h；S14、向第一混合液加入预冷的纯化剂二氯甲烷得到第二混合液，每1mg荔枝组织样品中加入0.01mL的纯化剂；将所述第二混合液置于3℃～5℃下震动遮光浸提1.5～3h；于3℃～5℃下静置，直至所述第二混合液分层，取最下层溶液，将所述最下层溶液氮吹浓缩，得到浓缩后的第三混合液；S15、向所述第三混合液加入50％～80％的甲醇复合溶液定容，定容体积标记为V，得到第四混合液，其中，所述甲醇复合溶液与所述第三混合液的体积之比为1:0.9～1；步骤二、UPLC-QQQ-MSMS检测分析，其包括：S21、采用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪，将步骤一得到的过滤后的第四混合液上样至棕色样瓶进行UPLC-QQQ-MSMS检测分析，输出荔枝组织赤霉素的检测结果；其中，色谱条件如下：色谱柱为反相色谱柱，柱温为35～50℃，流速为0.3～0.4mLmin，进样量为1.5μL～2μL，流动相A为纯乙腈，流动相B为0.1％VV甲酸水溶液，通过梯度洗脱方式洗脱，高效液相色谱的洗脱程序为：0.0～4.0min，10％～90％乙腈；4.0～5.0min，90％乙腈；5～5.1min，90％～10％乙腈；5.1～7.0min，10％乙腈；质谱条件如下：电喷雾离子源为负离子模式，检测方式为多反应检测模式，离子源温度为120～150℃，锥孔气压为30～40V，锥孔气流50LHr，碰撞能量为15～30V，毛细管电压为2.00kV，脱溶剂气温度450～500℃，脱溶剂气流1000LHr，质谱离子对信息为GA1347.0259.2，GA3345.1143.2，GA4331.1213.2，GA7329.1223.2；步骤三、赤霉素定量分析，其包括：S31、分别对每种赤霉素进行定量分析，绘制各赤霉素的标准曲线，得出各赤霉素的线性回归方程，将步骤二UPLC-QQQ-MSMS检测的赤霉素检测结果代入所述线性回归方程，得到各赤霉素的浓度C；S32、计算荔枝组织赤霉素，计算公式为：FW＝CVWFW为荔枝组织赤霉素的含量；C为赤霉素浓度；V为定容体积；W为荔枝组织样品质量。

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