申请/专利权人：香港科技大学

申请日：2021-05-28

公开（公告）日：2024-05-10

公开（公告）号：CN113736858B

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844

优先权：["20200528 US 63/102,048"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.10#授权;2021.12.21#实质审查的生效;2021.12.03#公开

摘要：本申请涉及一种恒温特异性核酸检测的新方法，具体地，带有荧光、电化学活性或侧流试纸标记的环状探针和引物组可以在不具有5'‑3'核酸外切酶活性的DNA聚合酶催化下对靶核酸进行扩增，同时切刻内切酶可特异性识别扩增产物并从环状探针延伸的产物上切割标记，从而实现在恒定温度下核酸序列的快速、实时准确的监测。

主权项：1.一种用于实时检测样品中的靶核酸序列的方法，该方法包括：a使所述样品中的所述靶核酸序列扩增；b将所述样品与聚合酶、包括正向引物和反向引物的外引物对以及包括环状探针和辅助探针的内引物对混合，以提供反应混合物，其中：i所述环状探针包括与所述靶核酸中的第一位点具有互补性的第一核酸序列，所述第一核酸序列可操作地连接至标记并可操作地连接至两个或更多个核酸内切酶结合位点，其中所述两个或更多个核酸内切酶结合位点中的一者具有阻止所述环状探针的核酸内切酶消化的至少一个经替换的碱基对，并且所述辅助探针包括与所述靶核酸的第二位点具有互补性的第二核酸序列；其中，至少一个所述核酸内切酶结合位点的序列为切刻内切酶结合位点；所述环状探针和或辅助探针为用于环介导等温扩增反应的环状引物；所述环状探针为具有3'突出端和与其相连的茎区的单链环状DNA，该3'突出端包含所述第一核酸序列，所述茎区的5'端包含CG碱基并且连接所述标记，所述茎区还包含所述切刻内切酶结合位点，并且该位点中包含所述的阻止所述环状探针的核酸内切酶消化的至少一个经替换的碱基对；以及ii所述正向引物和所述反向引物与所述靶核酸的至少一部分互补；c将核酸内切酶添加到所述反应混合物中；以及d如果所述反应混合物中存在所述靶核酸序列，则扩增所述靶核酸序列，其中当合成与所述环状探针互补的DNA链时，从所述环状探针上切割所述标记，并且目标靶核酸与包括所述环状探针的序列的核苷酸序列杂交；其中所述环状探针的所述标记为荧光标记，并且所述环状探针还包括与所述第一核酸序列可操作地连接的猝灭剂标记；或者所述环状探针的所述标记为电化学活性分子；或者所述环状探针的所述标记为侧流试纸标记分子。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 香港科技大学 一种环状寡核苷酸探针介导的核酸扩增子的实时监测方法

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