申请/专利权人：天津国科医疗科技发展有限公司;苏州国科医工科技发展(集团)有限公司;中国科学院苏州生物医学工程技术研究所

申请日：2022-03-11

公开（公告）日：2024-05-10

公开（公告）号：CN114487210B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.10#授权;2024.04.19#专利申请权的转移;2024.04.19#著录事项变更;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明公开了一种基于磁性固相萃取的类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：S1、磁性固相萃取方法进行样本中类固醇激素的前处理，制备测试样：S2、构建标准曲线；S3、采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，结合构建的标准曲线得到测试样中的类固醇激素的含量。本发明提供的基于磁性固相萃取的类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，使用了磁性固相萃取方法进行样本中类固醇激素的前处理，其基于基质分散型固相萃取，藉由外部磁场将磁性固相萃取填料进行转移，整个实验流程易于实现自动化，能减轻实验人员负担；同时，还保留了固相萃取高选择性、高净化率的优点。

主权项：1.一种基于磁性固相萃取的类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备测试样：S1-1、取样品管，向其中加入待测样本和内标溶液，混匀；S1-2、活化：取另一样品管，加入磁珠，使用甲醇活化磁珠；S1-3、平衡：使用磁性固相萃取仪器将步骤S1-2处理后得到的磁珠移入高纯水中，平衡磁珠；S1-4、使用磁性固相萃取仪器将步骤S1-3处理后得到的磁珠移入S1-1样品管中，混匀；S1-5、一次淋洗：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入第一淋洗液中，混匀；S1-6、二次淋洗：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入第二淋洗液中，混匀；S1-7、洗脱：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入洗脱液中，混匀，然后通过磁性固相萃取仪器移弃磁珠，移取样品管中的洗脱液，并稀释，混匀，得到测试样；S2、构建标准曲线：配置不同浓度的类固醇激素标准液，供液相色谱串联质谱法检测，以构建待测的类固醇激素的标准曲线；S3、采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，结合构建的标准曲线得到测试样中的类固醇激素的含量；所述步骤S1具体包括：S1、制备测试样：S1-1、取样品管，向其中加入300-700uL的待测样本和5-15uL的内标溶液，混匀1-5min；S1-2、活化：取另一样品管，加入1-5mg磁珠，使用100-400uL甲醇活化磁珠；S1-3、平衡：使用磁性固相萃取仪器将步骤S1-2处理后得到的磁珠移入200-600uL高纯水中，平衡磁珠；S1-4、使用磁性固相萃取仪器将步骤S1-3处理后得到的磁珠移入S1-1样品管中，混匀1-5min；S1-5、一次淋洗：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入300-700uL的第一淋洗液中，混匀1-5min；S1-6、二次淋洗：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入300-700uL的第二淋洗液中，混匀1-5min；S1-7、洗脱：使用磁性固相萃取仪器将磁珠移入25-100uL洗脱液中，混匀1-5min，然后通过磁性固相萃取仪器移弃磁珠，移取样品管中的洗脱液，并向洗脱液中加入25-100uL高纯水进行稀释，混匀1-5min，10000-20000转分钟下离心2-10min，得到测试样；所述步骤S3中，液相色谱检测条件为：色谱柱：十八烷基硅胶填料柱；流动相：A相为甲酸水溶液，B相为甲酸甲醇溶液；梯度洗脱程序：初始，30%B；0-1min，45%B；1-7min，60%B；7-8.5min，100%B；8.5-10min，100%B；10-10.1min，30%B；10.1-11.5min，30%B；流速：0.5mLmin；进样量：20µL；柱温：40℃；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；检测方式：多反应监测；气帘气15psi，喷雾器60psi，辅助加热气25psi，温度350℃，离子化电压5500V，碰撞气9psi。

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