申请/专利权人:楷拓生物科技(苏州)有限公司;武汉楷拓生物科技有限公司;上海楷拓生物科技有限公司
申请日:2024-04-16
公开(公告)日:2024-05-17
公开(公告)号:CN118048420A
主分类号:C12P19/34
分类号:C12P19/34;C12N15/10
优先权:
专利状态码:在审-公开
法律状态:2024.05.17#公开
摘要:本发明涉及一种加帽mRNA的制备方法。本发明的制备方法包括:提供反应体系;将反应体系于36~38℃孵育加帽,反应体系的组分为:1~3mgmL体外合成的mRNA;0.5~0.9mMMgCl2;0.1~1.5UmLRNaseIII;40~60mMTris‑HCl;2~8mMKCl;0.5~2mMDTT;0.1~0.5UμL牛痘病毒加帽酶;0.5~2UμLCap2’‑O甲基转移酶;0.1~1mMGTP;0.1~0.5mMSAM;其余为无RNA酶水。本发明提高了mRNA回收率,且在保证加帽率和减少dsRNA含量的同时,提高了mRNA完整度,可为mRNA药物发展提供有力支持。
主权项:1.一种加帽mRNA的制备方法,其特征在于:所述制备方法包括以下步骤:提供反应体系;将反应体系置于恒温培养振荡器中36~38℃孵育反应,然后采用pH值为7.8~8.0的EDTA缓冲液终止反应,得到含有加帽mRNA的反应液,其中,所述反应体系的组分为:1~3mgmL体外合成的mRNA;0.5~0.9mMMgCl2;0.1~1.5UmLRNaseIII;40~60mMTris-HCl;2~8mMKCl;0.5~2mMDTT;0.1~0.5UμL牛痘病毒加帽酶;0.5~2UμLCap2’-O甲基转移酶;0.1~1mMGTP;0.1~0.5mMSAM;其余为无RNA酶水。
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权利要求:
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